1、無菌、無毒的環境：對培養液和所有培養用具進行無菌處理，通常還要在培養液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外應定期更換培養液，以便清除代謝產物防止細胞代謝產物累積對細胞自身產生危害。
2、營養物質：無機物（無機鹽、微量元素等），有機物（糖、氨基酸、促生長因子等）
3、血清和血漿 (提供細胞生長必須的營養成份)
4、溫度和pH（36.5±0.5℃，7.2～7.4）
5、氣體環境（95%的空氣+5%CO?的混合氣體）
6、其中5%CO?氣體是為保持培養液的pH穩定
