取動物胚胎或幼齡動物器官、組織。將材料剪碎，并用胰蛋白酶（或用膠原蛋白酶）處理（消化），形成分散的單個細胞，將處理后的細胞移入培養基中配成一定濃度的細胞懸浮液。懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，當貼壁細胞分裂生長到互相接觸時，細胞就會停止分裂增殖，出現接觸抑制。
此時需要將出現接觸抑制的細胞重新使用胰蛋白酶處理。再配成一定濃度的細胞懸浮液。另外，原代培養就是從機體取出后立即進行的細胞、組織培養。
當細胞從動植物中生長遷移出來，形成生長暈并增大以后，科學家接著進行傳代培養，即將原代培養細胞分成若干份，接種到若干份培養基中，使其繼續生長、增殖。通過一定的選擇或純化方法，從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質。
培養條件：
1、無菌、無毒的環境：對培養液和所有培養用具進行無菌處理，通常還要在培養液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外應定期更換培養液，以便清除代謝產物防止細胞代謝產物累積對細胞自身產生危害。
2、營養物質：無機物（無機鹽、微量元素等），有機物（糖、氨基酸、促生長因子等）。
3、血清和血漿 。(提供細胞生長必須的營養成份)
4、溫度和pH。（36.5±0.5℃，7.2～7.4）
5、氣體環境。（95%的空氣+5%CO?的混合氣體）
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