動物肝臟RNA的制備(苯酚法)和純度測定2

試劑和器材
試劑
1.DNA標準溶液(須經定磷確定其純度)：取小牛胸腺DNA鈉鹽以0.01mol/L氫氯化鈉溶液配成200 μg/mL的溶液。
2.樣品待測液：準確稱取DNA干燥制品以0.01mol/L氫氯化鈉溶液配成100 μg/mL左右的溶液。在測定RNA制品中的DNA含量時，要求RNA制品的每mL待測液中至少含有20μg DNA，才能進行測定。
3.二苯胺試劑：使用前稱取1g重結晶二苯胺，溶于100mL分析純的冰乙酸中，再加入10mL過氯酸（60%以上），混勻待用。臨用前加入1mL1.6%乙醛溶液。所配得試劑應為無色。
器材
1.分析天平 2.恒溫水浴 3.試管 4.吸量管（2mL和5mL） 5.分光光度計

[附3]地衣酚顯色法測定RNA含量

原理
核糖核酸與濃鹽酸共熱時，即發生降解，形成的核糖繼而轉變為糠醛，后者與3，5-二羥基甲苯（地衣酚）反應呈鮮綠色，該反應需用三氯化鐵或氯化銅作催化劑，反應產物在670nm處有最大吸收。RNA在20～250μ g范圍內，光吸收與RNA的濃度成正比。地衣酚反應特異性較差，凡戊糖均有此反應，DNA和其他雜質也能給出類似的顏色。因此測定RNA時可先測定DNA含量，再計算出RNA含量 。

操作方法
一、RNA標準曲線的制定
取10支試管，分成2組，依次加入0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mLRNA標準溶液。分別加入蒸餾水使最終體積為2.5mL。另取2支試管，各加入2.5mL水作為對照。然后各加入2.5mL地衣酚試劑。混勻后，于沸水浴內加熱20分鐘。取出冷卻（自來水中）。于670nm波長處測定光吸收值。取兩管平均值，以RNA濃度為橫坐標，光吸收值為縱坐標作圖，繪制標準曲線。
二、制品的測定
取2支試管，各加入2.5mL待測液，（樣品量應在標準曲線的可測范圍之內），再加2.5mL地衣酚試劑。如前所述進行測定。
三、RNA含量的計算
根據測得的光吸收值，從標準曲線上查出相當該光吸收值的RNA含量。按下式計算出制品中RNA的百分含量：

試劑和器材
試劑
1.RNA標準溶液（須經定磷確定其純度）：取酵母RNA配成200 g/mL的溶液。
2.樣品待測液：準確稀釋，使每mL溶液含RNA干燥制品50-100 g。
3.地衣酚試劑：先配制0.1%三氯化鐵的濃鹽酸（分析純）溶液，實驗前用此溶液作為溶劑配成0.1%地衣酚溶液。
器材
1.分析天平 2.沸水浴 3.試管 4.吸量管 5.分光光度計