一、試劑配制
1. 5 mol/L NaCl 溶液：將292.3 g NaCl 溶于水，稀釋至1 000 ml。
2. 0.14mol/L NaCl-0.15mol/L EDTA-Na 溶液： 溶8.18g NaCL 及37.2g EDTA-Na 于蒸餾水，稀釋至1 000 ml。
3. 25% SDS 溶液： 溶25 g 十二烷基硫酸鈉于100 ml 45% 乙醇。
4. 0.015 mol/L NaCl 0.0015 mol/L 檸檬酸三鈉溶液： 氯化鈉 0.828 g及檸檬酸三鈉0.341 g 溶于蒸餾水，稀釋至1 000 ml。
5. 氯仿-異戊醇混合液：氯仿：異戊醇=24：1（V/V）。
6. 1.5 mol/L NaCL-0.15 mol/L檸檬酸三鈉溶液：氯化鈉 82.8 g 及檸檬酸三鈉34.1 g溶于蒸餾水，稀釋至1 000 ml。
7. 3 mol/L乙醇鈉 0.001 mol/L EDTA-Na溶液： 稱取乙酸鈉 408 g，EDTA-Na 0.372g 溶于蒸餾水，稀釋至1 000 ml。
8. 70%乙醇，80%乙醇，95%乙醇，無水乙醇。 9. 1 mol/L過氯酸溶液：將10 ml 過氯酸（70%）用蒸餾水稀釋至110 ml。
二、 DNA的分離純化
1. 將10頭小白鼠迅速殺死，取出肝臟，用0.14 mol/L NaCl 0.15mol/l EDTA溶液洗去血漿，剪碎，加入50 ml 0.14mol/L NaCl -0.15 mol/L EDTA溶液，置勻漿器中研磨，待磨成糊狀后，將糊狀物離心10分鐘（4 000 r/min），棄去上清液，沉淀用0.14 mol/L NaCl-0.15mol/L EDTA溶液洗二、三次，所得沉淀為脫氧核糖核蛋白粗制品。
2. 向上述沉淀物加入0.14 mol/LNaCl-0.15mol/L EDTA溶液，使總體積為44 ml，然后滴加25% SDS溶液 3 ml，邊加邊攪拌，加畢，置60水浴保溫10分鐘（不停攪拌）溶液變的粘稠并略透明，取出冷至室溫。此步操作是使核酸與蛋白質分離。
3. 加入5 mol/LNaCl 10 ml，使NaCl 最終濃度達到1 mol/L，攪拌10分鐘，加入約一倍體積的氯仿―異戊醇混合溶液，振搖20分鐘，離心10分鐘（4 000 r/min）。去掉沉淀，上層清液徐徐加入1.5-2倍95%乙醇，DNA沉淀即析出，用玻棒慢慢攪動，則DNA絲狀物即纏在玻棒上。
4. 將DNA粗品置于27 ml 0.015 mol/L NaCl -0.0015 mol/L檸檬酸三鈉溶液中，再加入3 ml 1.5 mol/L NaCl-0.15 mol/L檸檬酸三鈉溶液，攪勻，加入一倍體積氯仿―異戊醇混合液，振搖十分鐘，離心（4 000 r/min，10分鐘），傾出上層液體（沉淀棄去），加入1.5倍體積95%乙醇，DNA即沉淀析出。離心，棄去上清液，沉淀（粗DNA）按本操作步驟重復處理一次。
5. 將上步所得沉淀于27 ml 0.015 mol/L NaCl-0.0015 mol/L檸檬酸三鈉溶液中，然后以線狀徐徐加入2倍95%乙醇，邊加邊攪，取出絲狀DNA，依次用70%，80%，95%以及無水乙醇各洗一次，真空干燥。 收起 | 