| 實驗方法原理 | Trizol試劑是一個包含酚、異硫氰酸胍和SDS的單相酸性溶液，其在裂解細胞的同時抑制RNase的活性，隨后加入氯仿，酚會大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下層的氯仿酚溶液中，RNA則分布在上層的水相中，最后用異丙醇沉淀水相中的RNA，并用70%乙醇洗滌沉淀，這樣就可以得到比較純凈的總RNA。 |
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| 實驗材料 | |
| 試劑、試劑盒 | |
| 實驗步驟 | 一、 先在研缽中加入液氮，再將組織剪成小塊在液氮中磨成粉末，用液氮預冷的藥匙取50-100 mg組織粉末加入已盛有1 ml的Trizol液的EP管中（注意組織粉末總體積不能超過所用Trizol體積的10%），充分混合均勻。
二、 室溫放置5 min，然后加入200 μl的氯仿，蓋緊EP管并劇烈搖蕩15秒鐘。
三、12 000 rpm離心10 min，取上層水相于一新的EP管中（千萬不要將中間的沉淀層和下層液混入，否則重新離心分離），加入500 ul 異丙醇，溫和顛倒混勻。室溫放置10 min，12 000 rpm離心10 min。
四、 小心地棄去上清液，加入1 ml的75%乙醇，渦旋混勻，4℃下12 000 rpm離心5 min。重復操作一次。
五、 棄去上清液（盡量將殘余液體除去），室溫或真空干燥5-10 min（注意不要干燥過分，否則會降低RNA的溶解度）。用30 ul DEPC處理過的水將RNA溶解，必要時可55℃-60℃水浴 10 min。RNA可進行mRNA分離，或貯存于70%乙醇并保存于-70℃。 |