做完裂解之后加Triton X－100輕搖３０min，蛋白溶解的會多些！
四、包涵體的復性
1、包涵體如何復性
包涵體的復性主要有兩種方式：
1，稀釋溶液，但是操作的液體量大，蛋白稀釋
2，透析，超濾或電滲透析去除變性劑
其中透析很適合實驗室應用，但是時間長。另外，如果蛋白質右兩個以上的2硫鍵，很可能錯誤形成配對，應用還原劑。還有，復性的具體方法還要根據前期試驗及篩選來確定！
另外，你用多大體積的透析緩沖液？可能不夠，要更換幾次
你家了多少蛋白呀 ？蛋白量過大也會使復性困難。
你用的透析代是否是新的，處理過沒有？新代有化學雜質！
最后，有些復性過程就是還有沉淀（透析方法的缺點）看看溶液中蛋白含量，說不定已經夠用了~~
包涵體的復性還要注意以下幾點：
1.首先要獲得較高純度的包涵體。
2.包涵體溶解要徹底，一般應使溶解液體量較大，不要怕蛋白被稀釋，要有助溶措施。
3.透析前后均要離心
4.透析不能太快.
5.純化的最佳條件要摸索。
小技巧：
1）包含體要徹底洗滌干凈，洗滌液中加入適量Triton-X100.
2) 包含體溶解后裝入透析袋在復性液中復性
3）復性液的組成很有講究，本人使用 Oxidised Glutathione/ Reduced Glutathione 還加入一定的L-Arginine-Hydrochloride 12-24h
4) 復性完畢在低濃度的緩沖液中連續緩慢透析12-24h
5) 復性率的測定 據變性蛋白和非變性蛋白的光學性質不同測定（望有經驗的戰友能更詳細地講解）
6）TritionX100、SDS這一類去垢劑最后不易去除，在制藥行業中一般不允許采用。好像SDS最后殘留量不能大于0.5%吧，忘了。
我用Triton洗滌有些包涵體效果不是很好。包涵體洗滌是純化極為重要的一步，改變培養條件，再洗滌包涵體，有時可以在上柱前已經只剩下3-4條雜帶，這樣后續的純化就很方便了。因為色譜柱的純化條件比較難optimize。
這段文字可以參考：
用Novagen公司《pET System Manual》提供的方法，分別進行細菌滲透休克，超聲波裂解，研究融合蛋白在細胞周質，細胞質和包涵體中的分布。
滲透休克 用1.2.3方法誘導細菌（10ml體積），測菌液OD600，10000 r/min離心0.5 min去上清，加入滲透休克溶液1（V1= OD 600×V2/5，V1為滲透休克溶液1，V2為培養新鮮菌液），冰浴10 min，10000 r/min離心0.5 min，去上清。加V1體積滲透休克溶液2重懸，搖動冰浴10 min，10000 r/min離心0.5 min，保存上清、細菌沉淀。作如下處理：上清用三氯乙酸(TCA Trichloroacetic acid) 沉淀，加1/10體積100% TCA (w/v)，渦漩15 sec.，冰浴10 min，13000 r/min離心5 min，100 ul丙酮洗滌沉淀，干燥1 h，加V1/2體積1× PBS（pH 10）溶解，-20℃保存，取10 ul加入等體積2×SB，進行12% SDS-PAGE電泳分析，UNIUER SAL HooD-S.N. 75s 成像系統照相。
超聲波裂解細菌 滲透休克細菌沉淀加1/10培養體積20 mM Tris-HCl（pH 7.5，0℃）重懸，冰浴，超聲波裂解，20%工作選擇，脈沖粉碎1 min，然后13000 r/min離心5 min，-20℃保存上清、細菌沉淀。上清進行TCA沉淀，處理同上。沉淀用Protein Extraction Reagent（Ni-NTAHi Bind Purification Kit BugBuster. 提供 ）按 Novagen公司《pET System Manual》提供方法反復處理，洗滌包涵體。包涵體按培養菌100×OD600/3 ul體積加1% SDS溶解，加等體積2×SB，進行12% SDS-PAGE電泳分析，進行蛋白條帶灰度掃描，計算融合蛋白Trx-PrPC27-30占細菌總蛋白的相對含量。
1.2.7重組融合蛋白的純化
PrP-pET-32a（+）轉化表達菌E.coli BL21（DE3），TB培養基中，25℃，AMP 200 ug/ml，搖床（250 r／min）培養至OD600約為1.5，更換等體積新鮮TB培養基，加入IPTG至終濃度1 mM，AMP 200 ug/ml，25℃，4 h，4000 g離心收集菌體。按 Ni-NTA HiBind Purification Kit使用說明溶解包涵體，純化融合蛋白。
或使用筆者改進方法，將Ni-NTA HiBind Purification Kit使用說明中Buffer D改成Wash-Buffer，Buffer-E改成Elute-Buffer，最后用Buffer-E重生Ni-NTA HiBind Rasin，Binding- Buffer平衡以后加50%酒精保存，以免長菌。
洗脫所得蛋白用TCA沉淀，處理同上，得融合蛋白Trx-PrPC27-30，凍干保存。然后12% SDS-PAGE凝膠電泳分析。
3、包涵體復性2
精氨酸可助溶，但精氨酸是代謝產物高濃度對人可能不好。