三、臨床樣本的采集與處理
(一)皮屑 邊緣、皰壁、膿液、深層趾(指)間皮屑或活動邊緣皮屑，取材前75%酒精消毒，作KOH涂片，同時種于沙氏瓊脂加氯霉素2管，置25℃培養2周。
(二)甲屑 用細挫或牙科磨鉆取病甲與正常甲交界處并且貼近甲床部的甲屑，標本用酒精浸泡待干燥后種于沙氏(SDA)培養4周，并同時作KOH涂片。
(三)毛發 取病發(變色，無光澤，彎曲，脆易折斷，松動易拔除)15根，75%酒精消毒，3～5根作直接鏡檢，5～10根種于沙氏瓊脂(加氯霉素)，劃破斜面掩埋。
(四)膿液 無菌采集，注意顆粒，用無菌蒸餾水稀釋后尋找。可作G染色或抗酸染色，常規的KOH涂片及SDA接種培養也是必要的。
(五)CSF 采集于無菌試管3～5ml，立即送檢。置冰箱不宜超過1h。離心后以無菌吸管吸取離心沉淀物1ml，作墨汁涂片鏡檢和培養(SDA)25℃或37℃4周。
(六)血液 無菌抽血3～5ml立即于無菌抗凝管中，BHIB:血標本量為培養基量的1/10，37℃5～7d出現渾濁或菌團，挑取鏡檢同時移種SDA(注：每天檢查完畢后需搖動培養基，37℃震蕩培養可加速真菌的生長，提高檢出率。不作直接檢查，因其直接檢查陽性率低。
(七)體液、痰液、尿液、糞便①體液標本量10ml離心沉淀取2ml沉淀液做直接鏡檢培養。②晨痰3～5ml集于無菌瓶中(無菌生理鹽水漱口數次后)，挑取黏液或膿性部分：KOH涂片培養。③早晨中段尿或清潔尿10ml，離心取沉淀液1ml做KOH涂片培養(SDA每管種0.5ml)。④拭子：一般盡量不用，缺點：A.不能得到足量的標本；B.采集的標本也不易從棉花纖維上分離下來；C.容易干竭。采集標本后應迅速放入內裝1~2ml無菌蒸餾水的試管送檢KOH涂片培養。⑤紙盒送檢，挑取黏液、膿血、乳酪樣部分KOH涂片培養(加抗生素)注：單純培養陽性，不一定有臨床意義，KOH涂片發現菌絲，有診斷意義。
(八)組織：標本置無菌平皿中立即送檢，置無菌勻漿器加2ml蒸餾水，研磨成漿或1～2mm3的小塊，KOH涂片培養。
四、真菌學檢驗的基本技術
(一)直接鏡檢
是最簡單也是最有用的實驗室診斷方法，常用的方法有：①氫氧化鉀/復方氫氧化鉀法：標本置于載玻片上，加一滴浮載液，蓋上蓋玻片，放置片刻或微加熱，即在火焰上快速通過2～3次，不應使其沸騰，以免結晶，然后輕壓蓋玻片，驅逐氣泡并將標本壓薄，用棉拭或吸水紙吸去周圍溢液，置于顯微鏡下檢查。檢查時應遮去強光，先在低倍鏡下檢查有無菌絲和孢子，然后用高倍鏡觀察孢子和菌絲的形態、特征、位置、大小和排列等。浮載液：A.10%~20%的KOH。配方：氫氧 化鉀10～20g，蒸餾水加至100ml，待氫氧化鉀完全溶解后揺勻存放在塑料瓶內，適用于皮屑、甲屑、毛發、痂皮、痰、糞便、組織、耵聹等的檢查。B.復方氫氧化鉀溶液配方：氫氧化鉀(AR)10g，二甲基亞砜(AR)40ml，甘油50ml, 蒸餾水加至100ml,配制方法：將氫氧化鉀先加入30ml蒸餾水中溶解后，再依次加入DMSO、甘油揺勻后，用蒸餾水加到100ml，裝入塑料瓶內。此配方的優點是：配方中加DMSO，能促進角質的溶解，有甘油涂片不易干，不易制成氫氧化鉀結晶，氫氧化鉀的濃度相對低，腐蝕性亦低，為進行大面積普查或大批量采集標本作鏡檢帶來了方便。②膠紙粘貼法：用1cm×1.5cm的透明雙面膠帶貼于取材部位數分鐘后自取材部位揭下，撕去復帶在上面的底板紙貼在載玻片上，使原貼在取材部位的一面暴露在上面，再進行革蘭染色或過碘酸錫夫染色，在操作過程中應注意雙向膠帶粘貼在載玻片上時不可貼反，而且要充分展平，否則影響觀察。③涂片染色檢查法：在載玻片上滴1滴生理鹽水，將所采集的標本均勻涂在載玻片上，自然干燥后，火焰固定或甲醇固定。再選擇適當的染色方法，染色后，以高倍鏡或油鏡觀察。
常見鏡檢染色方法有：①革蘭染色。所有真菌、放線菌均為革蘭染色陽性，被染成藍黑色。適用于酵母菌、孢子絲菌、組織孢漿菌及諾卡菌、放線菌的感染。②乳酸 酚棉藍染色：用于各種真菌培養物的鏡檢。③印度墨汁：用于檢測腦脊液(CSF)中的新生隱球菌。④抗酸染色：用于抗酸菌及諾卡菌的診斷。⑤瑞氏染色：用于組織胞漿菌和馬內菲青霉的檢測。⑥過碘酸錫夫染色(PAS)：用于體液滲出液和組織勻漿等。真菌胞壁中的多糖染色后呈紅色，細菌和中性細胞偶可呈假陽性，但與真菌結構不同，不難區別。⑦嗜銀染色(GMS)：真菌可染成黑色，主要用于測定組織內真菌。