自從發現雙鏈RNA能引發RNA干擾(RNA interference,RNAi)現象后,RNAi已經成為分析基因功能的重要工具之一。隨著RNAi技術在植物基因功能分析上的廣泛應用,迫切需要一種高通量構建發夾RNA(hpRNA)表達載體的方法。
中科院華南植物園華南農業植物遺傳育種重點實驗室博士生言普在導師段俊研究員的指導下,研究出了一種基于Golden Gate克隆技術構建含內含子發夾結構RNA(ihpRNA)表達載體的新方法。利用該方法,只需在擴增靶基因序列的同時,由引物在序列兩端加上相應的BsaI識別和切割位點,經一步酶切/連接反應后,此靶基因片段能同時以正向和反向的位置克隆到pRNAi-GG,形成ihpRNA表達載體結構;整個構建過程只需在一管中通過一個反應完成,構建效率高,且無背景干擾,同時由于pRNAi-GG為植物雙元表達載體,構建好的ihpRNA表達載體可直接用于農桿菌轉化研究。
該載體構建方法具有簡單、快速、高效和成本低等優點,為大規模的植物功能基因研究提供了一個高通量的平臺。相關研究成果已發表在國際學術期刊PLoS ONE[2012,5(7):e38186]上。

A、pRNAi-GG的發夾RNA表達框結構。B、利用pRNAi-GG構建植物ihpRNA表達載體的示意圖。
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