基本的簡化工藝開發
上樣準備-樣品在上樣到MabSelect SuRe層析柱前必須經過過濾。至少必須使用無菌過濾器；另外，在無菌過濾前可以使用吸附深度過濾器。在細胞培養物收獲后，應該盡快完成運行。在細胞培養物運行前需要被保存的情況，應該經過無菌過濾并保存在4℃，或者冷凍保存（如可能）。
Run #0–空白運行-為了去除非共價固定的配基，應該在新的MabSelect SuRe層析介質上第一輪運行前進行空白運行，從而減少層析期間的配基泄露。上面列出的層析方法的所有階段應使用兩種變化-首先，在上樣階段應使用平衡緩沖液（即不含蛋白質），其次，空白運行的洗脫階段應被設置為3個柱體積，且不受監測功能的控制。
Run #1 –上樣條件-下一個實驗應該運行以確定MabSelect SuRe層析柱在2.4-4.8分鐘保留時間內對你的Mab的動態結合載量（DBC）。按照上述程序并使層析柱過載達到50 g/L，收集穿透組份，然后測定穿透組份中的Mab濃度，并計算5%穿透。
Run #2–設置上樣條件到5%穿透時80%動態載量，然后遵循上述所有步驟。如果這輪運行產生可接受的純度、質量和產量水平，可以鎖定這里所使用的工藝。
分析-在調節到下一步的上樣條件和通過無菌過濾器過濾后，分析Protein A步驟樣品的純度和質量。此外，在2或3步基于平臺工藝的層析步驟后，必須分析純度和質量。如果上述導致洗脫組份中的低產量或高宿主細胞蛋白殘留（HCP），則須優化清洗和洗脫條件完成進一步的工藝開發。
清洗條件-GE Healthcare已經完成了各種清洗條件的探索研究。為了了解更多關于這些研究的信息，請向您當地GE Healthcare公司的代表索取《討論對于Protein A的中間清洗步驟》的科學海報（參考文獻3）。
洗脫條件-可以考慮各種洗脫條件，例如檸檬酸緩沖液（10-100 mM）或甘氨酸。當優化洗脫條件用于更好的雜質清除時，確定抗體有效解吸的最高pH，然而，這可能會增加洗脫組份體積。另外，設計洗脫條件以匹配用于病毒滅活所需要的pH，如下面所討論。
步驟持續時間-這里提到的所有的步驟持續時間只是象征性的，如果特定步驟中層析圖和收集指示時間，可以縮短實際步驟的持續時間。
病毒滅活-洗脫組份中的pH應保持在3.6或更低至少持續30分鐘，用于適當的病毒滅活。如果洗脫組份具有更高的pH，需要通過添加酸滴定或通過對洗脫緩沖液體積的進一步優化降低pH。然后通過加入0.1 M NaOH調節pH，pH必須馬上被調整到最匹配下一步上樣條件。（例如對于陽離子交換為pH 5-6或對于Capto adhere為pH 6-8）。在洗脫期間可能會發生沉淀，且一般發生在pH滴定后低pH病毒滅活期間。有可能沉淀包含脂類和微量Mab、HCP和Protein A。這種沉淀物可以使用無菌過濾器去除-必須選擇正確的過濾膜的孔徑-盡管生產中通常使用的過濾膜孔徑對于這一步已經足夠大。
結論
推薦的工藝開發途徑是采用HTPD和分析多個條件。本文件中提供的信息是基于以前的經驗，并可以作為步驟開發的起點。為了獲得步驟或工藝開發的進一步幫助，請聯系您當地的GE Healthcare銷售代表或GE Healthcare的Fast Trak部門。
注釋：
*應使用正確裝柱方法-詳情見參考文獻2（壓縮系數1.15）；
** 0.1 M醋酸將有大約2.9的pH，不具有緩沖能力。洗脫組份的結果pH將取決于洗脫組份體積和之前的洗滌緩沖液的緩沖能力。在大多數情況下，洗脫組份pH將在3.5-4.0之間；
***對于循環時間：假設物料濃度為2.5g/L，上樣載量為35g/L。保存時間和保存后的平衡時間不計（~53分鐘）。
參考文獻
