實驗材料 單層細胞
試劑、試劑盒 PBS多聚甲醛甲醇抗體
儀器、耗材 離心機水浴鍋培養箱
實驗步驟
1. 置生長成片的單層細胞于冰上冷卻，吸去培養液并以4℃PBS洗滌。吸去PBS。
2. 如欲研究細胞表面抗原，則以2%PFA于冰上面定30 min。如為細胞質抗原，則可用含0.1% Triton X-100的2%PFA于冰上固定30 min，或以100%甲醇在普通冰箱的結凍室（-10~-20℃）固定15 min。
3. 吸去固定液，用4℃PBS洗2次（毎次5 min）。稀釋的笫一抗體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min。
4. 加第一抗體于培養皿中，使其恰好覆蓋細胞，4℃溫育1 h，然后用4℃PBS洗4次（每次5 min）。
5. 稀釋的笫二抗體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min。
6. 加第二抗體于細胞上，4℃溫育4 h。然后用4℃PBS洗4次。
7. 若不想立即觀察細胞，則將細胞于PBS中存放。蓋好培養皿，以鋁箔包裹，冷藏，在24 h 內觀察此實驗結果是很重要的，因熒光會迅速減弱或與細胞解離。