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  • 發布時間:2019-08-08 23:21 原文鏈接: 單細胞凝膠電泳技術的試驗步驟

    試劑及材料:
    1)PBS
    2)0.8%正常熔點凝膠(PBS配制)
    3)0.6%低熔點凝膠(PBS配制)
    4)毛玻璃片
    5)蓋玻片
    6)堿性裂解液(2.5mol/L NaCl;100mmol/L Na2EDTA;10mmol/L Tris;1%肌氨酸鈉),臨用前加10%DNMSO,1%Triton X-100
    7)電泳緩沖液(1mmol/L Na2EDTA;300mmol/L NaOH;Tris.Cl,pH7.5)
    8)EB(2ug/ml)
    步驟:
    1.制備第一層膠:100ml 0.8%正常熔點膠,加蓋蓋玻片,4℃固化10min;
    2.制備第二層膠:輕輕地去除蓋玻片,在第一層膠上滴加75ul含1×10000個細胞的0.6%低熔點膠(cell與凝膠比例為1:5),加蓋蓋玻片,4℃固化10min;
    3.裂解:去掉蓋玻片,將凝膠浸入冰冷的堿性裂解液內(臨用前加10% DMAO,1%Triton X-100),4℃裂解1h;
    4.取出玻片,用PBS緩沖液漂洗3次后置于水平電泳槽內,加入pH13的電泳緩沖液(沒過玻片2-3min),放置20min(黑閉)。
    5.電泳:電壓20V,300mA,30min
    6.取出玻片,用PBS或Tris.Cl,pH7.5漂洗3次,每次3min;
    7.染色:膠上滴加3ulEB,加蓋蓋玻片,24h檢測。或者4℃,潮濕,閉光的條件下保有膠片,觀察時再染色,鏡檢。

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