1. 選用原代細胞生長狀態好（90－95％），生長數量大于5×10?進行傳代。
2. 吸除原代細胞培養液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細胞培養瓶2次。
3. 3ml細胞消化液加入細胞培養瓶，輕輕搖動，使細胞消化液覆細胞培養瓶底。（建議使用賽奧斯的原代細胞消化液。）
4. 細胞培養瓶置于5%CO2、95%空氣、37℃培養箱靜置培養2分鐘后，在顯微鏡下觀察原代細胞的消化狀態。（如貼壁細胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后，用手指輕輕拍打細胞培養側部至大部分貼壁細胞懸浮，加入3ml血清終止液，終止細胞消化。每種原代細胞的消化時間是有差異的。）
5. 吹打培養瓶中懸浮細胞若干次，再吸出細胞懸浮液，轉入15ml離心管中，1000rpm離心5分鐘。注：推薦客戶用PriCells原代細胞培養體系
6. 棄離心管中液體，加入原代細胞培養液重懸細胞。細胞計數，確定細胞數量。
7. 細胞分瓶后，加入適量原代細胞培養液至細胞培養瓶中，置于5%CO2、95%空氣、37℃培養箱靜置培養24小時。