| 實驗步驟 |
1.取材:先將種子浸泡若干小時,然后轉入一墊有濕潤濾紙的培養皿中,置25℃恒溫培養箱中萌發,待幼根長至1～2cm取材;或鱗莖置于盛水的培養皿中,放在25℃恒溫培養箱中,待根尖長至2cm左右取根尖(頂端0.5～1cm)。
2.預處理:將取下的根尖置于盛有對二氯苯飽和水溶液的青霉素瓶中,浸泡處理3～4h。
3.前低滲:將根尖放在0.075mol/LKCl溶液中處理30min。
4.酶解去壁:倒去KCl溶液,用蒸餾水充分洗凈。加入混合酶液(纖維素酶與果膠酶各占2.5%),25～30℃下酶解2～3h。在酶解過程中最好輕輕搖動瓶子,促使酶解反應更加充分。
5.后低滲:倒去酶液,用蒸餾水慢慢沖洗2～3次,然后在蒸餾水中停留10min進行后低滲處理。
6.固定:甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液固定30min。
7.涂片:取2～3個根尖置于擦干的潔凈載玻片上,切下頂端1～2mm,滴上1～2滴甲醇-冰醋酸(3∶1)固定液,用鑷子迅速搗碎根尖組織,均勻涂布于載玻片上,在酒精燈火焰上掠過3～4次。
8.染色:Giemsa原液與1/15mol/L磷酸緩沖液(pH7.2)以20∶1混合,分裝入染色缸,將干燥的制片置于染液中,也可將染液直接滴在載玻片上,染色時間約30min。自來水沖洗載玻片,空氣干燥后即可進行鏡檢。
先在低倍物鏡下進行觀察,找到較好的中期分裂相后,直接加顯微鏡油并轉換為油鏡頭進行觀察(若使用香柏油,則需加蓋玻片,因為在香柏油中染色體會褪色)。選擇較好的分裂相用顯微鏡上配備數碼照相裝置攝影 展開 |
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