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  • 發布時間:2020-05-18 11:22 原文鏈接: 雙壓線性離子阱質譜用于單克隆抗體分子量測定(二)

     

     

    圖2. 對圖1 譜圖進行去卷積

     

    由圖1 及圖2 可以看出:首先,使用Velos pro 雙壓線性離子阱質譜對完整單克隆抗體(150kD)進行分子量測定,得到的譜圖中可見不同電荷態的峰均勻分布(圖1);對其使用ProMass 軟件進行去卷積分析,可知所測單克隆抗體分子量為147491Da,且不同糖型得到分辨(圖2)。

     

    Velos Pro 線性離子阱質譜用于單克隆抗體輕/ 重鏈分子量測定

    使用DTT 對完整單克隆抗體進行還原處理后,分別對抗體的輕、重鏈進行分子量測定,結果如下:

     

     

    圖3. LTQ Velos Pro 測定單克隆抗體輕鏈分子量

     

     

    圖4. LTQ Velos Pro 測定單克隆抗體重鏈分子量

     

    由圖3 及圖4 可以看出,對于DTT 處理后的單克隆抗體,分別測定其輕、重鏈分子量,同樣可得不同電荷態的峰均勻分布的譜圖;經去卷積后,分別可以得到輕、重鏈的分子量。其中重鏈部分的雜峰較多(圖4),可能為不同糖型及單抗發生降解所導致。

     

    結論

    在本文的研究中,我們使用Velos Pro 雙壓線性離子阱對完整單克隆抗體及其輕重鏈進行了分子量測定。結果表明:首先,對于完整單克隆抗體,離子阱質譜可以實現分子量測定并分辨出不同糖型;對于經DTT 還原后的輕、重鏈,離子阱質譜同樣可以測定其分子量和不同糖型。離子阱質譜可滿足傳統定性分析需求,是未知化合物結構解析的強大武器;在蛋白質藥物研究方面,被廣泛用于肽圖分析、序列鑒定和翻譯后修飾研究等。通過本文的研究,我們證明了離子阱質譜同樣可以用于單克隆抗體分子量的測定。

     

    同時,由于離子阱質譜可對化合物進行多級質譜解析,在肽段的翻譯后修飾研究、尤其是糖鏈的精細結構解析中起到不可或缺的作用。另外,雙壓線性離子阱Velos Pro同時具有高壓和低壓阱,高壓阱提供最大化離子捕獲、裂解和隔離效率,低壓阱提供其他離子阱質譜所無法比擬的分辨率和掃描速率。綜上,離子阱質譜亦為生物制藥行業相關分析的有力工具。

     

    參考文獻

    [1] Tonya Pekar Second, Joshua J. Coon, Vlad Zabrouskov. A Novel Dual-Pressure Linear Ion Trap Mass Spectrometer Improves the Analysis of Complex Protein Mixtures[J]. Anal Chem. 2009 September 15; 81(18): 7757–7765.


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