2．[操作步驟]
1. 將研磨管離心一分鐘（不低于12000×g）棄上清。
2. 加入裂解液（200-300ul）充分vortex.
3. 再加入樣品鼠腦組織（低于100mg）充分研磨。然后可以再加入裂解液至1ml..
4. 將組織懸液離心5-10min(高于12000g)去除樹脂和細胞碎片。
5. 收集上清。
3．[試劑準備]
1.研磨管
2.裂解液：稱取尿素4.8g、CHAPS0.4g、PMSF100mg，用純水溶解至10ml，分裝成500μl 于-20℃儲存，使用時，每500μl液體加DTT5mg,IPGbuffer10μl。
三、蛋白質定量
1．[基本原理]
定量作為生物實驗室的日常工作之一，具有非常重要的意義。在蛋白質組學研究中，我們常常需要對蛋白質進行快速定量。無論是對蛋白質表達譜的定量比較還是蛋白質理化性質的分析，都建立在準確的定量這一基礎之上。蛋白質的快速定量方法主要依靠蛋白質本身的發色基團，或其與其它顯色劑反應產生的紫外吸收來進行定量。表-1為五種蛋白質的測定方法的比較。目前常用的主要有直接紫外吸收法、Bradford法和Lorry法三種。
表-1 五種蛋白質測定方法的比較
| 方法 | 靈敏度 | 原理 | 干擾物質 |
| 凱氏定氮法（Kjedahl法） |
0.2～1.0mg |
將蛋白質轉換為氮，用酸吸收后滴定 | 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白質而分離） |
| 雙縮脲法 （Biuret法） |
1～20mg |
多肽鍵加堿性銅離子生成紫色絡合物 | 硫酸銨， Tris緩沖液和某些氨基酸 |
| Folin-酚試劑法 （Lowry法） |
5μg |
磷鉬酸-磷鎢酸試劑被Tyr和 Phe還原 | 硫酸銨， Tris緩沖液，甘氨酸，各種硫醇 |
| 考馬斯亮藍法 (Bradford法) |
1～5μg |
考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時其λmax由465nm變為595nm | 強堿性緩沖液，TritonX-100,SDS |
| 紫外吸收法 |
50～100μg |
蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收 | 各種嘌呤和嘧啶，各種 核苷酸 |
由于DNA具有的5'-磷酸腺嘌呤 ，5'-磷酸胞密啶和5'-磷酸鳥嘌呤在紫外光譜的260
nm處產生很靈敏的特征峰，我們可以以此對DNA進行定量測定。相似的，由于蛋白質中存在著含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，所以任何一個蛋白質都具有280nm附近的紫外吸收峰，在此波長范圍內，蛋白質溶液的光密度OD280nm與其濃度呈正比關系，我們可以對其進行定量。但該法存在無法彌補的缺陷。首先，對于測定那些與標準蛋白質中酪氨酸和色氨酸含量差異較大的蛋白質，有一定的誤差，故該法適于測定與標準蛋白質氨基酸組成相似的蛋白質。其次，若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物質，會出現較大干擾。
另一種可供選擇的蛋白質定量方法為Lorry法。其原理為，蛋白質與堿性銅溶液中的Cu2+絡和使得肽鍵伸展，從而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在堿性銅條件下與福林試劑反應，產生藍色，在一定濃度范圍內，其顏色的深淺與蛋白質中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比，由于各種蛋白質中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同，因此在測定時需使用同種蛋白質作標準。
實驗室通常采用改良的Bradford法進行測定蛋白質含量。其原理為，蛋白質與染料考馬斯亮藍G-250結合，使得染料最大吸收峰從465nm變為595nm，在一定的線性范圍內，反應液595nm處吸光度的變化量與反應蛋白量成正比，測定595nm處吸光度的增加即可進行蛋白定量。只需將eppendorf管換為ELISA板并相應的減少各個試劑的用量，這種方法可以應用到大規模高通量的試驗中，可以同時進行384個樣品的全自動準確定量