雙色熒光定量PCR快速診斷唐氏綜合征

摘要：目的建立快速診斷唐氏綜合征的熒光定量聚合酶鏈反應（FQ-PCR）方法及其應用于產前診斷唐氏綜合征的可能性。

方法：合成21號染色體單烤貝基因DSCR1特異的引物和TaqMan探針，其中檢測DSCR1基因的探針標記6-羧基熒光素（FAM），檢測GAPDH基因的探針標記六氯（HEX）熒光素；提取患者和正常人外周血及胎兒羊水脫落細胞標本的DNA為模板，在同一PCR擴增管中同時進行2種基因的雙色熒光定量聚合酶鏈反應（the double chromatography fluorescence quantitative polymerase chain reaction,DC-FQ-PCR）,分別定量測定DSCR1基因和GAPDH基因的含量，并計算每個標本2種基因劑量的比值；采用該基因檢測技術檢測23例唐氏綜合征患者、20名正常人和100例羊水，與染色體檢查診斷結果對比，判斷該技術在唐氏綜合征基因診斷和產前診斷中的應用價值。

結果：在30μL FQ-PCR反應體系中，加入最少約0.05ng基因組DNA能夠穩定地獲得擴增曲線；實驗表明23例染色體檢測為唐氏綜合征患者的GAPDH與DSCR1的差值為0.65±0.17，以2-△CT方法計算DSCR1與GAPDH烤貝數的比值范圍為1.77～1.39.而20例染色體檢測為正常人的GAPDH與DSCR1的差值為0.06±0.18，計算DSCR1與GAPDH烤貝數的比值范圍為1.18～0.92；2組間的差異有統計學意義。在100例羊水細胞的檢測中，以DSCR1與GAPDH烤貝數的比值大于1.35為唐氏綜合征的判定標準，發現2例為患兒，其余98例為正常，與染色體檢查結果一致。

結論：雙色熒光定量PCR檢測唐氏綜合征是一個可行的、快速的、準確的、高通量的、費用較為低廉的檢測方法，該法在唐氏綜合癥的基因診斷和產前基因診斷具有廣闊的應用前景。