反相高效液相色譜法的缺點有哪些

　　反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系，它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系（正相色譜）相反。

　　影響溶質保留值的三個因素

　　烷基鍵合固定相對每種溶質分子締合作用和解締作用能力之差,就決定了溶質分子在色譜過程的保留值。以下簡述影響溶質保留值的三個因素:

　　1）溶質分子結構

　　在反相鍵合相色譜法中,溶質的分離是以它們的疏水結構差異為依據的,溶質的極性越弱,疏水性也強,保留值越大。根據疏溶劑理論,溶質的保留值與其分子中非極性部分的總表面積有關,其與烷基鍵合固定相結出的面積愈人,保留值越大。

　　2) 烷基鍵合固定相的特性

　　烷基鍵合固定相的作用在于提供非極性作用表面,因此鍵合到硅膠表面的烷基數量就決定著溶質容量因子的大小。烷基的疏水特性隨碳鏈的加長而增加,溶質的保留值也隨著烷基碳鏈長度的增加而增人。隨著烷基碳鏈的增長,增加了鍵合相的非極性作用的表面積,其不僅影響溶質的保留值,還影響色譜柱的選擇性,即隨烷基碳鏈的加長其對溶質分離的選擇性也增大。

　　3) 流動相性質

　　流動相的表面張力愈大,介電常數愈大,其極性越強,此時溶質與烷基鍵合相得締合能力越強,流動相的洗脫強度弱,導致溶質的保留值越大。