造成發酵染菌的可能途徑有哪些?
菌種培養過程操作不當
培養基滅菌不徹底
發酵設備(如發酵罐、管道)密封不嚴
空氣除菌不凈
2.既然染菌不可避免,哪我們應該怎樣做?
要提高生產技術水平,強化生產過程的管理,把握好各個易染菌的環節,盡可能防止發酵染菌的發生;而且一旦發生染菌,要能盡快找出其污染的原因,并采取相應的有效措施,把發酵染菌造成的損失降低到最小。
3.不同發酵過程相對危害最大的雜菌種類?
青霉素的發酵 細短產氣桿菌
鏈霉素的發酵 細短桿菌、假單孢桿菌
四環素的發酵 雙球菌、芽孢桿菌、莢膜桿菌
谷氨酸的發酵 噬菌體
檸檬酸的發酵 青霉菌
4.不同生產階段染菌對發酵的影響:
種子培養期染菌:對整個發酵過程的危害極大
發酵前期染菌:嚴重干擾生產菌的生長繁殖
發酵中期染菌:干擾生產菌的代謝,影響產物的生成
發酵后期染菌:影響相對較小
5.不同染菌原因對發酵的影響:
種子帶菌:將導致染菌范圍不斷擴大,使生產蒙受重大損失。
空氣帶菌:使發酵大面積染菌
培養基或設備滅菌不徹底:一般不具延續性,使單個(批)發酵罐發酵失敗
設備滲漏:染菌幾率較大
6.發酵異常現象及染菌原因分析:
(1)溶解氧的異常變化
當雜菌是好氣性微生物時,溶解氧的變化是在較短時間內下降,直至接近于零,且在
長時間內不能回升;
當雜菌是非好氣性微生物,而生產菌由于受污染而抑制生長,使耗氧量減少,溶解氧升高。
(2)排氣的CO2異常變化
如雜菌污染時,糖耗加快, CO2含量增加,噬菌體污染后,糖耗減慢,CO2含量減少。因此,可根據CO2含量的異常變化判斷染菌。
(3)其它異常現象:
如菌體生長不良、pH值的異常變化、發酵過程中泡沫的異常增多、發酵液的顏色異常變化、代謝產物含量的異常下跌、發酵周期的異常拖長、發酵液的粘度異常增加等判斷染菌。
7.染菌原因分析:
(1)從染菌的規模來分析染菌原因
大批發酵罐染菌:空氣系統
部分發酵罐(或罐組)染菌:前期可能是種子帶雜菌,或滅菌不徹底,中后期則可能是中間補料系統或由管路系統發生問題所造成的
個別發酵罐連續染菌:設備問題(如閥門的滲漏或罐體腐蝕磨損),設備的腐蝕磨損所引起的染菌會出現每批發酵的染菌時間向前推移的現象
個別發酵罐偶然染菌:原因比較復雜,因為各種染菌途徑都可能引起。
(2)從染菌的時間來分析
發酵早期染菌:種子帶菌、培養基和設備滅菌不徹底、設備或管道有死角中、后期染菌:中間補料、設備滲漏、操作不合理
(3)從染菌的類型來分析:
耐熱性芽孢桿菌:死角或滅菌不徹底
球菌、酵母:可能是從蒸汽的冷凝水或空氣中帶來的淺綠色菌落(革蘭氏陰性桿菌) :發酵罐的冷卻管或夾套滲漏霉菌:滅菌不徹底或無菌操作不嚴格
(4)設備滲漏的原因:當設備滲漏時,往往每批染菌發生的時間逐漸提前
a發酵液中腐蝕性物質對設備的腐蝕
b磨蝕
c設備加工不良
(5)盤管滲漏的防止:
放罐后要認真清洗發酵罐
控制冷卻水質量,降低其中氯離子含量
對盤管定期檢查、試漏,及時發現漏隙
試漏方法:氣壓試驗 水壓試驗
空氣分布管滲漏的防止
罐體滲漏的防止
管件的滲漏
管路的連接:
螺紋連接 法蘭連接 焊接
(6)空氣過濾系統方面原因:
原因分析:進風口、生產環境、空氣過濾器
染菌特點:空氣過濾系統帶菌會使發酵罐批批染菌、罐罐染菌,此時就要對空氣過濾系統進行無菌樣檢測
8.染菌的檢查和判斷
①無菌試驗方法
②顯微鏡檢查法(鏡檢法)
③肉湯培養法
④平板劃線培養或斜面培養檢查法
發酵過程的異常現象觀察法
如果肉湯連續三次發生變色反應(由紅色變為黃色)或產生混濁,或平板培養連續三次發現有異常菌落的出現,即可判斷為染菌。
9.雜菌污染的挽救及處理:
(1)種子培養期染菌:應經滅菌后棄之,并對種子罐、管道等進行仔細檢查和徹底滅菌
(2)發酵前期染菌:營養成分消耗不多,應迅速重新滅菌;另處,補充必要的營養成分,重新接種進行發酵。
(3)發酵中、后期染菌:可以加人適當的殺菌劑或抗生素以及正常的發酵液,以抑制雜菌的生長速度;產品的含量若達一定值,只要明確是染菌也可放罐。
(4)發酵后對設備的處理:空罐加熱滅菌后至120℃以上、30min后,才能使用。也可用甲醛熏蒸或甲醛溶液浸泡12h以上等方法進行處理