可溶性白細胞介素2受體SIL-2R的濃度的高低與許多疾病有密切聯系，如成人T淋巴細胞白血病艾滋病、B細胞慢淋、毛細胞白血病，以及腎移植后發生急性排斥反應時或異基因骨髓移植發生移植物抗宿主時，患者血清中SIL-2R水平明顯升高。（來源：醫學基礎免疫學實驗指導，主編金伯泉李恩善，第1 版，北京：世界圖書出版社，1990）
| 實驗方法原理 | 將抗Tac特異性單克隆抗體Ab1吸附于固相載體，識別細胞培養上清或血清等標本中Tac并與之結合。應用辣根過氧化物酶標記的識別另一種Tac表位的特異性單克隆抗體Ab2識別固定于固相載體的Tac并與之結合。通過酶催化底物顯色反映待檢標本中游離Tac的水平。 |
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| 實驗材料 | 抗體PHA |
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| 試劑、試劑盒 | 緩沖液洗滌液稀釋液終止液 |
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| 儀器、耗材 | 塑料板檢測儀水浴箱冰箱CO2孵箱加樣器 |
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| 實驗步驟 | 1. 刺激外周血單個核細胞（PBMC）
取外周血10 ml，肝素抗凝，常規分離單個核細胞，加至24 孔細胞培養板，2×106 /孔，RPMI1640-10％ FCS＋PHA 3 μg/ml，Wellcome公司，37 ℃、5 ％CO2培養72 小時，收集上清，-20 ℃保存待測。同時設未加PHA對照組。可選用病人血清為待測標本。
2. Ab1包被
用0.05 M pH9.6碳酸鹽包被緩沖液將抗Tac特異性單克隆抗體（Ab1）稀釋至5 μg/ml，加至ELISA板，100 μl/孔，4 ℃包被72 小時。
3. 封閉
1 ％BSA-PBS封閉，350 μl/孔，37 ℃孵育2小時。
4. 加樣
ELISA板用PBS-T洗液洗3次，PHA刺激單個核細胞培養上清及對照組上清或病人血清倍比稀釋至1∶1024，每一稀釋度取100 μl加至ELISA板。HUT-102B2細胞培養上清為陽性對照，RPMI1640-10％FCS培養液為陰性對照。37 ℃，孵育2 小時，洗滌。
5. 加酶標抗體
于各反應孔加辣根過氧化物酶標記另一種抗 Tac 特異性單克隆抗體Ab2以效價滴定的最佳稀釋度稀釋100 μl。37 ℃孵育2小時，洗滌。
6. 加底物顯色
各反應孔加新鮮配制ABTS底物溶液100 μl，37 ℃，孵育15 分鐘。
7. 終止反應
各反應孔加2 ％氟化鈉終止液50 μl。
8. 結果判定
首先肉眼觀察反應孔內顏色，稀釋梯度是否均勻。陽性、u性結果是否明顯。然后于ELISA檢測儀上測各孔OD值（410 nm）。 展開 |
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| 注意事項 | 1. 包被抗體活性要較高，否則影響本實驗敏感性。
2. 經篩選比較，封閉液以1 ％BSA-PBS為好。
3. 酶標結合物應用前應進行效價滴定，選擇最佳工作濃度。
4. 底物應選用靈敏度較高的供氫體如ABTS等。
5. 如有條件，酶標McAb可由生物素-McAb和親和素-HRP系統代替，以增加實驗的敏感性。 展開 |
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