可溶性蛋白質考馬斯亮藍G250法測定的原理

　　考馬斯亮藍G－250(GooMAssIe BrIllIAnT Blue G－250)測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。考馬斯亮藍G－250在游離狀態下呈紅色，在稀酸溶液中，當它與蛋白質的疏水區結合后變為青色，前者最大光吸收在465nM，后者在595nM。在一定蛋白質濃度范圍內(1～100μg)，蛋白質與色素結合物在595nM波長下的光吸收與蛋白質含量成正比，故可用于蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍G－250結合在2Min左右的時間內達到平衡，完成反應十分迅速，其結合物在室溫下1H內保持穩定。該反應快速靈敏(靈敏度比FolIn－酚法還高4倍)、易于操作、干擾物質少(考馬斯亮藍G－250和蛋白質通過范德華力結合，受蛋白質的特異性影響較小，除組蛋白外，其他不同種類蛋白質染色強度差異不大)，可測定微克級蛋白質含量，是一種比較好的蛋白質定量法。但此方法也存在其缺點，考馬斯亮藍在蛋白質含量很高時線性關系偏低，且不同來源蛋白質與色素結合狀況有差異。