實驗概要
本實驗首先在微量滴定板中表達可溶性SCFv，然后取上清液進行ElISA實驗。
主要試劑
1. 含100ug/ml氨芐青霉素和0.1％葡萄糖的2XTY培養基(2 ×TY/amp/0.1％glu)
2. 含100ug/ml氨芐青霉素和3mmol/L IPTG的2XTY培養基(2×TY/amp/glu/IPTG)
3. 9E10單抗(SantaCruzBiotech)
4. PBS
5. PBS／0.1％Tween 20(PBS／Tween)
6. 4％MPBS
7. 抗小鼠HRP標記抗體
主要設備
用于細菌培養的96孔圓底微量滴定板
實驗材料
噬菌體樣品，含有抗體片段的上清
實驗步驟
1．用96孔無菌轉移設備或移液器從主板中，每孔取2ul；而后轉移至1個每孔含有100ul 2×TY/amp/0.1％glu的無菌96孔微量滴定板中。
2．將孔板在37℃振蕩孵育，直到A600值約為0.9(通常需2～3小時)。
3．每孔加50ul 2XTY/amp/glu/IPTG(最終IPTG濃度為lmmol/L)。繼續將孔板在30℃振蕩16小時。
4．以2700r/min離心孔板15分鐘；取上清可進行ELISA 。
5．按每孔100pl蛋白抗原包被微量滴定板，4℃過夜。PBS中10ug／m1的濃度是包被抗原的標準濃度。但有時需要更高的濃度或者不同的包被緩沖液(比如碳酸鹽緩沖液)。
6．棄去抗原液并用PBS洗滌板孔2次。
7．加入200gl的2％MPBS封閉每個板孔，37℃孵育2小時。
8．用PBS洗滌板孔3次。
9．每孔加入50ul的4％MPBS。
10．每孔加入50ul含可溶性抗體的培養基上清，用移液器反復吹吸混勻，室溫孵育1小時。
11．棄去溶液，用PBS／Tween洗滌板孔3次，再用PBS洗滌3次。
12．每孔加入100ul 9E10單抗(用2％MPBS按1：1000稀釋)。室溫孵育孔板l小時。
13．棄去溶液，用PBS／Tween洗滌板孔3次，再用PBS洗滌3次。
14．每孔加入抗小鼠HRP(用2％MPBS按1：2000稀釋)。室溫孵育孔板1小時。
15．棄去二抗，并用PBS／Tween和PBS分別洗滌3次。
16．每孔加入100ul TMB系統溶液，并在暗處室溫孵育10～30分鐘。數分鐘內，應呈現藍色。
17．每孔加入50～100ul終止液，終止反應。
18．在450nm處讀板。