實驗方法原理 1. 溶解性:葉綠素和類胡蘿卜素均不溶于水而溶于有機溶劑,常用乙醇或丙酮提取。
2. 分離色素的方法有多種,如紙層析. 柱層析等。紙層析是其中較簡單的一種。當溶劑不斷地從層析濾紙上流過時由于混合色素中各種成分在兩相中(即流動相和固定相)間有不同的分配系數,它們的移動速度不同,使樣品中的各種成分得到分離。
3. 葉綠素受光激發,可發出紅色熒光,反射光下可見紅色熒光。
4. 皂化反應:葉綠素是二羧酸酯,與強堿反應,形成綠色的可溶性葉綠素鹽,就可與有機溶劑中的類胡蘿卜素分開。
5. 取代反應:在酸性和加溫條件下,葉綠素卟啉環中的Mg2+可依次被H+和Cu2+取代形成褐色的去鎂葉綠素和綠色的銅代葉綠素。
6. 定量分析,葉綠素吸收紅光和蘭紫光,紅光區可用于定量分析,其中645和663用于定量葉綠素a,b。
實驗材料 小麥植物葉片
儀器、耗材 電子天平 分光光度計層析缸
實驗步驟
一、材料與設備:
1、實驗材料:小麥、菠菜等植物的葉片
2、儀器:(1)電子天平 (2)分光光度計(3)層析缸
二、方法:
取鮮葉3g+100%丙酮10ml,磨成勻漿
色素分離方法:取一直徑略大于培養皿的圓形濾紙,用吸管吸取樣品滴于濾紙的中心處一滴,風干或烤干,在原位置重復七次。取另一寬約1cm的長條濾紙,搓成紙芯后從樣品點中心穿過,使紙芯與圓形濾紙垂直。在培養皿內放一小鋁盒,平放在培養皿上,盒內加適量汽油并加入1-2滴苯,把已處理好的濾紙芯下端浸入汽油中,迅速蓋好培養皿蓋,此時汽油借毛細管引力順紙條擴散到圓形濾紙上,并把葉綠素沿著濾紙向四周推動,不久即可看到被分離的各種色素的同心圓環。
結果計算: