葉綠素(chlorophyll，chl)含量測定

實驗原理

葉綠素含量測定是植物生理研究常做的實驗之一, 測定結果可為農作物的科學施肥或其它農業措施以及植物病理的診斷等提供科學依據。葉綠素含量測定可采用目視比色法和分光光度法, 兩者相比, 后者比前者具有更高的精度, 而且能在未經分離的情況下分別測定葉綠素a、b的含量。葉綠素總量是以Wintermans及DeMots（1965）提出的公式（6.10×A665nm＋20.04×A649nm）計算。

試劑和器材

一、試劑

無水乙醇；95％乙醇；

50 mmol/L磷酸緩沖溶液（pH 6.8）。

二、材料

新鮮植物葉片

三、器材

研缽、分光光度計。

操作方法

一、葉綠素提取

取少量新鮮植物葉片,以2 mL 磷酸緩沖溶液（50 mmol/L, pH 6.8）將其研磨成均質。吸取40 mL上清液，注入1.5mL eppendorf 管中，再加入960 mL無水乙醇，置于4℃黑暗下30分鐘。然后于4℃下以1000 g離心15分鐘，以分光光度計分別測定665 nm、649 nm波長處吸光值，以95％乙醇做空白。

二、計算

葉綠素總量＝6.10×A665nm＋20.04×A649nm

葉綠素含量是以每克鮮重含有葉綠素的毫克數（mg g-1）表示。

注意事項

葉綠素易被強光和熱破壞，實驗操作易在黑暗和低溫條件下進行。