各級分蔗糖酶活性測定及純化率的計算實驗

用測定生成還原糖( 葡萄糖和果糖) 的量來測定蔗糖水解的速度, 本實驗中, 蔗糖酶的活力單位指在一定條件下反應5 min，產生1 毫克葡萄糖所需酶量。

用考馬斯亮藍法測定蛋白質含量, 比活力為每毫克蛋白質的活力單位數。

蛋白質

乙酸緩沖液 葡萄糖 蔗糖 二硝基水楊酸

分光光度計 水浴鍋 試管 保鮮膜

1.  各級分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ蔗糖酶活性測定

用0.02 mol/ L, pH4.9 乙酸緩沖液(也可以用pH5～6 的去離子水代替) 稀釋各級分酶液, 測出酶活合適的稀釋倍數:
 

Ⅰ : 1 000～10 000 倍
 

Ⅱ : 1 000～10 000 倍
 

Ⅲ : 100～1 000 倍
 

以上稀釋倍數僅供參考。
 

按順序在試管中加入各試劑, 進行測定, 為簡化操作可取消保鮮膜封口, 沸水浴加熱改為用90～95 ℃ 水浴加熱8～10 min。

以5 min 生成的還原糖的毫克數為縱坐標, 以試管中1ml 反應混合物中的酶濃度( mg蛋白/ml) 為橫坐標, 畫出反應速度與酶濃度的關系曲線。

2.  計算各級分的比活力、純化倍數及回收率
 

蛋白質含量測定同蛋白質系列實驗三。為了測定和計算下面純化表中的各項數據, 對各個級分都必須取樣, 每取一次樣, 對于下一級分來說會損失一部分量, 因而要對下一個級分的體積進行校正, 以使回收率的計算不致受到不利的影響。