合成培養基配制實驗——無血清培養基的制備

ECM

蒸餾水

濾膜

1.  選擇適宜的培養基質（ECM），先制備成貯存干液；

2.  使用前，貯存干液用高純度的蒸餾水稀釋成0.1 mg/ml 濃度的使用液；

3.  使用液用0.22 μm 孔徑的微孔濾膜過濾除菌；

4.  用吸管吸取使用液，均勻涂于消毒滅菌的細胞培養器皿的細胞生長表面。使用液的用量可按每平方厘米表面加50 μl的溶液，為保證其表面全部被溶液浸濕，用量可適當增減；

5.  室溫下靜置5 分鐘（使用膠原做基質時，可適當延長時間至24 小時），然后吸出多余的溶液；

6.  再用滅菌蒸餾水（100 μl/cm2）洗滌涂有ECM的表面，然后盡量將水分吸凈控干；

7.  根據不同細胞生長特點，接種適宜濃度的細胞進行培養。

1.  制備過程要在嚴格無菌條件下進行。

一、自制無血清培養基舉例

1.  小鼠胚胎癌細胞系培養基

DMEM/F12，1：1 混合成1000 ml；NaHCO_3，2.4 g；HEPES（1.5 M），10.0 μl；硒酸（5×^－6 M），10.0 μg；纖粘連蛋白，1 μg/cm²（37℃作用15—30 分鐘）；胰島素，1000.0 μg；轉鐵蛋白，5000.0 μg。

2.  NIH3T3 小鼠成纖維細胞培養基

DMEM/F12，1：1 混合；HEPES，15 mM；大豆胰酶抑制劑，0.1%；胰島素，10.0 μg/ml；轉鐵蛋白，25.0 μg/ml；纖粘連蛋白，5.0 μg/ml。

3.  人支氣管上皮細胞培養基

DMEM/F，1：1 混合；HEPES，15 mM；硒酸鈉，2.5×10^－8 M；胰島素，5.0 mg/ml；胰高血糖素 0.2 μg/ml；維A酸10^－9 M（或三碘甲狀腺原胺酸5×10^－10 M）。

4.  正常人乳腺上皮細胞培養基

MCDB170 基礎培養液；胰島素，5.0 μg/ml；氫化可的松，0.5 μg/ml；表皮生長因子（EGF），5.0 mμg/ml；乙醇胺，10^－4 M；磷酸乙酸胺，10^－4 M；轉鐵蛋白，10 μg/ml；牛垂體提取物，70 μg/ml。

5.  雜交瘤細胞系培養基

DMEM/F12，1：1 混合；NaHCO_3，1.2 g/L；HEPES，15.0 mM；胰島素，5.0 μg/ml；氨基乙醇，20.0 μM；硒酸，2.5 mM；轉鐵蛋白，35.5 μg/ml。

以上僅是個別實驗室的應用配方，但仍有很大的參考意義。然而某一種成分是否必需，并不是絕對的，用量也可以變更。如雜交瘤細胞無血清培養基可去除氨基乙醇；轉鐵蛋白降至每毫升5 微克，同樣也能獲得繼續分泌抗體的結果。