同時測定三聚氰胺和三聚氰酸（二）

發布時間：2020-03-09 23:14 原文鏈接：同時測定三聚氰胺和三聚氰酸（二）

通過幾個色譜因子的綜合考慮可以為方法優化提供更大的適應性，并能控制三聚氰酸的保留時間，大概在6~15min的范圍。

圖3. 流動相的總離子強度對保留時間的影響。

質譜檢測優化

質譜檢測的優化和色譜的優化相結合。圖4是最優化分離度、靈敏度和高通量方法的校準標準色譜圖。

圖4. 最優化條件下的校準標準色譜圖。

寵物食品的方法驗證

線性和校正曲線

美國FDA的校正標準中，使用穩定的元素標記物（三聚氰胺－15N3和三聚氰酸－13C3）作為內標物（ITSD）。這些標準物用來做標準曲線，計算線性。從2ng/ml到200ng/ml的范圍內的線性非常好，可見圖5，圖6。

圖5. 三聚氰胺的校準曲線。

圖6. 三聚氰酸的校準曲線。

方法檢測限（MDL）

方法檢測限通過對校正標準物7次重復進樣，以及下面方程式來計算：

MDL=tgg%×S｛n=7｝

t在99%的置信區間（tgg%，n=7 = 3.143），S為標準偏差。三聚氰胺和三聚氰酸的MDL分別為3.97 ng/ml和3.92 ng/ml。

生物樣品的方法驗證

色譜圖

從美國FDA獲得的豬和魚組織提取物（控制和加標樣）用FDA的標準來處理，所有的生物樣品揮發干后用流動相重溶。圖7是控制樣品（空白豬肉樣品的提取物，提取前ISTD，三聚氰胺或三聚氰酸加標）的SIM色譜圖。

圖7. 對FDA控制樣品揮發并用流動相重溶后測定的色譜圖。

重現性

由于多次進樣會對色譜造成影響，未知化合物的積累造成干擾，這些干擾物需要額外計算，例如梯度運行或柱子清洗，因此驗證方法的重現性是非常重要的。在這個研究中，通過重復進樣三聚氰胺和三聚氰酸加標樣品來驗證方法重現性，結果見表2。對三聚氰胺的保留時間和量的重現性都非常好。三聚氰酸保留時間的重現性有一點變換，可能是樣品處理中殘留的甲酸的影響。

表2. 方法重現性

結論

本文介紹了一種簡單、快速的LC-MS方法，可同時檢測三聚氰胺和三聚氰酸，三聚氰胺和三聚氰酸的保留時間和整個分析周期都令人滿意，方法重現性也得到驗證；質譜檢測器的檢出限<5 ng/ml；線性極佳，在2~200 ng/ml的范圍內R2>0.9995。目前該方法已用于分析美國FDA處理的生物樣品。