體內具有吞噬功能的細胞群按其形態的大小分兩類:一類為大吞噬細胞,即組織中的巨噬細胞和血液中的大單核細胞。它們對異物有吞噬和消化的功能,在機體非特異性免疫、特異性免疫和免疫調節中有重要的作用,因此,通過測定吞噬細胞的吞噬作用可判斷機體的免疫力。另一類為小吞噬細胞,即中性粒細胞。中性粒細胞的功能包括粘附、移動、吞噬殺菌等,是機體天然免疫力的重要組成部分。
(一)中性粒細胞吞噬功能的測定
【材料】
1試劑:白色葡萄球菌,肝素溶液,甲醇,堿性美藍染液。
2器材:血紅蛋白吸管,凹玻片,載玻片,1mL注射器及26號針頭,采血針,酒精棉球等。
【方法】
1菌液的制備
將白色葡萄球菌接種于肉湯培養基中,放37℃溫箱內培養12h左右;置100℃水浴中加熱10min,殺死細菌,用無菌生理鹽水稀釋成每毫升6×108個細菌備用。
2試驗方法
用血紅蛋白吸管吸取受試者耳垂或指血40uL,立即加入盛有20uL肝素(濃度為
20U/mL)的潔凈凹玻片的凹孔內,輕輕攪動混勻,再加上述葡萄球菌菌液20uL充分混勻。然后置入鋪有濕紗布的有蓋容器內(此容器先放37℃溫箱中預溫),在37℃溫箱中作用30min,其間每隔10min搖勻一次。作用完畢,取1小滴混合液置于潔凈無油污的載玻片一端,推成薄片。待干后,用甲醇固定4~5min,堿性美藍液染2~3min,置油鏡下觀察。隨機計數100個中性粒細胞,分別記錄發生吞噬和未吞噬的白細胞數,對有吞噬作用的白細胞,應同時記錄所吞噬的細菌數。
3結果表示方法
(1)吞噬細胞(%):即100個中性粒細胞中吞噬有細菌的細胞數;
(2)吞噬指數:將100個中性粒細胞所吞噬的細菌總數除以100,得到每個白細胞吞噬細菌的平均數,即為吞噬指數。
4臨床應用
一般多用于病人治療前后白細胞吞噬指數與百分率的動態變化,作為觀察療效和判斷預后的參考指標。
【注意事項】
本法可清楚地觀察到中性粒細胞的清理作用,但作為科研指標,客觀性差,不宜采用。
(二)巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗
【材料】
1動物:昆明種小白鼠。
2試劑:1%雞血球,2%面粉或淀粉肉湯,瑞特氏染液。
3器材:無菌注射器及針頭,玻片。
【體內方法】
1于實驗24小時前,在小鼠腹腔內注射1mL淀粉肉湯。
2次日重復注入淀粉肉湯1mL,經過1小時后再給小鼠腹腔內注入1%雞血球懸液1mL。
3血球注射后1小時,用注射器抽取小鼠腹腔滲出液做涂片,自然干燥后,進行瑞氏染色(方法同前)。
4用油鏡觀察巨噬細胞漿內有無被吞噬的雞紅細胞,并進行計數。
5結果:
(1)吞噬百分率:油鏡下觀察100個巨噬細胞,計算吞噬百分率,以表示吞噬細胞的吞噬功能。正常值為60%左右。
(2)吞噬指數。按下列公式算出吞噬指數(即每個吞噬細胞吞噬雞紅細胞的平均數):吞噬指數=100個巨噬細胞中所吞噬的雞紅細胞總數/100
(3)吞噬雞紅細胞的等級觀察:借以判定巨噬細胞吞噬和消化功能,Ⅰ級表示吞噬功能,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級表示消化功能強弱。
Ⅰ級:被吞噬的雞紅細胞完整,未消化,胞漿淺紅或淺黃帶綠色,胞漿淺紫紅色。
Ⅱ級:輕度消化,胞漿淺黃綠色,核固縮,染成紫藍色。
Ⅲ級:重度消化,胞漿淡染,胞核呈淺灰黃色。
Ⅳ級:完全消化,巨噬細胞內僅見形態類似雞紅細胞大小的空泡,邊緣整齊,胞核隱約可見。
【注意事項】
雞紅細胞呈橄欖球形,有清楚的細胞核,亦呈橄欖球形,染色后清晰可見,容易與小白鼠的紅細胞相區別。本實驗的觀察指標是吞噬百分率、吞噬指數,這兩個指標是主觀指標,客觀性差。