六種化合物的線性關系良好,相關系數為0.9991~0.9998,實現了20min內對六種化合物的同時測定。
相關標準
樣品處理
稱取2~3g粉碎均勻的樣品,加水15mL,超聲振蕩5min,取出后加入2mL亞鐵氰化鉀溶液,搖勻,再加入2mL乙酸鋅溶液,搖勻,用氫氧化鈉溶液調pH值約為7,用水定容到25~50mL,4 000r/min離心5min,取上清液經0.45μm水系濾膜過濾,供高效液相色譜測定。若樣品中含有較多的脂肪時,可將定容好的樣液轉移到分液漏斗中,加入正己烷10ml,振搖1min,靜置分層,棄去正己烷層,再加入10mL正己烷重復提取一次,取下層水相置于離心管中,4 000r/min離心5min,取上清液經0.45μm水系濾膜過濾,供高效液相色譜測定。
高效液相色譜檢測條件的確定
試驗方法
1.檢測波長的選擇
經紫外光譜掃描190~400nm波段,得出六種物質的最大吸收波長分別為:乙酰磺胺酸鉀(安賽蜜)226nm,糖精鈉202nm,阿斯巴甜208nm,苯甲酸226nm,山梨酸257nm,脫氫乙酸230nm、293nm。故選擇205nm作為這六種食品添加劑同時測定的波長,在波長205nm下各物質靈敏度相近,基質干擾少,樣品前處理相對簡單,可簡化日常工作,縮短檢測時間,提高檢測效率。
2.流動相及流動相比例的選擇
查閱文獻及現行有效的國家標準,在測定防腐劑和甜味劑時采用的流動相多是甲醇和乙酸銨。試驗發現單獨選用甲醇與乙酸銨或乙腈與乙酸銨時,六種化合物中的糖精鈉與阿斯巴甜都不能得到良好分離。試驗采用甲醇:乙腈:0.01mol/L乙酸銨做流動相,發現三種試劑的不同比例對分離度、峰形、靈敏度影響較大。有機相含量低時,標準物質出峰時間長;有機相含量高時,標準物質出峰時間縮短。選用0.01mol/L乙酸銨與甲醇、乙腈比例為(95:1:4)、(94:2:4)、(93:3:4)的流動相進行等度試驗,結果表明,當0.01mol/L乙酸銨與甲醇、乙腈的比例為93:3:4時,各待測物質都能得到較好的分離,分析時間適中。
標準曲線的測定
1.苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜混合標準使用液的配制
分別吸取苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜標準儲備液(濃度為1.0mg/mL,由國家標準物質中心購買)0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL于10mL容量瓶中,加水至刻度,即得含苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的標準使用液系列。用0.45μm水相微孔濾膜過濾,待測。
2.高效液相色譜條件
色譜柱:Agilent C18液相色譜柱;流動相:乙腈:甲醇:0.01mol/L乙酸銨為4:3:93;流速:1.0mL/min;柱溫:30℃,進樣量:10μL;檢測器:紫外檢測器,波長205nm。按以上色譜條件將六種物質的混合標準使用液進行色譜分析,以保留時間定性,峰面積外標法定量。
儀器儀表
Agilent 1200液相色譜儀,紫外檢測器(VWD),自動進樣器(G1313A),Agile ntC18液相色譜柱,超聲波水浴振蕩器,離心機,分析天平(感量0.0001g)。