哺乳動物中制備基因組DNA實驗——制備DNA

動物組織

PBS乙酸銨乙醇酚氯仿異戊醇TE

離心機搖床研缽

1.  切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結。

2.  將200 mg~1 g 的組織用預冷的研缽和研杵研碎，或用錘子將其搗為細粉末，每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。
 

3.  500 g 離心細胞5 min，棄上請。貼壁生長細胞先用胰酶消化。

4.  細胞用1~10 ml 冰冷的PBS重懸，500 g 離心5 min，棄上清，重復1次。

5.  用1體積 的消化緩沖液重懸細胞。

6.  將樣品在蓋緊的管中于50℃搖蕩下溫育12~18 h。

7.  用等體積的酚/氯仿/異戊酵抽提樣品，1 700 g 離心10 min。

8.  如果樣品溶解得不好， 再加1體積不含蛋白酹K的消化緩沖液，并重復離心。

9  如果在界面上有一層厚的白色物質，重復有機抽提，將上層（水溶液）轉移至一個新管中。

10.  加入1/2體積7.5 ml 乙酸銨和2體積100%乙醉，1 700 g 離心2 min。

11.  用70%乙酵洗滌，晾干，沉淀用TE。

12.  緩沖液重新溶解，使終濃度在約1 mg/ml 左右。

1.  如果是用肝組織，要除去膽囊，因其含有高水平的各種消化酶。