哺乳動物細胞培養過程&培養條件

哺乳動物細胞培養過程

哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取，原代培養，傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分為細胞株培養和細胞系培養。如下對各個過程進行簡述：

原代培養：從動物機體取出組織后切碎，經過各種酶（常用胰蛋白酶），螯合劑（常用EDTA）結合機械方法（吸液管反復吸吹）處理，分散成單細胞，置于合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖。一般把從動物有機體內取出細胞開始培養，到繁殖十代以內的細胞培養稱為原代細胞培養。

經過原代細胞培養，細胞分裂繁殖，培養物逐漸增多長滿培養空間，繼而相互之間接觸，發生接觸抑制現象，生長速度逐漸減慢甚至停止。需要重新接種到新的培養瓶內進行傳（繼）代培養。
傳（繼）代培養：將原代細胞從培養瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養瓶中繼續培養，稱為傳（繼）代培養。

細胞系：初代培養物開始第一次傳代培養后的細胞，即稱之為細胞系。如果細胞系的生存期有限，則稱為有限細胞系。已獲得無限繁殖能力，能持續生存的細胞系稱為連續細胞系或無限細胞系。
細胞株：從一個經過生物學鑒定的細胞系，用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增值形成的細胞群，稱為細胞株。再由原細胞株進一步分離培養出與原珠形狀不同的細胞群，成為亞株。

哺乳動物細胞培養條件

不同哺乳動物細胞在各個階段的培養，都需要有基礎的培養條件，歸納如下：

1、無菌無毒的環境：對培養液和所有培養用具無菌處理；培養液中添加抗生素防止培養過程中污染；定期更換培養液以清除代謝產物，防止對培養細胞造成危害。

2、營養：液體合成培養基包含糖、氨基酸、促生長因子、水、無機鹽、微量元素等；通常還需加入血漿、血清等天然成分。

3、適宜的溫度和pH：人和哺乳動物細胞最適宜溫度大多為36±0.5℃。適宜的酸堿度為pH 7.2-7.4。

4、氣體環境：氣體環境一般為“95% 空氣+5% CO2”混合氣體。氧氣是細胞代謝必須氣體，CO2維持培養液pH。