哺乳類無菌動物技術

實驗概要

本實驗介紹了哺乳類無菌動物的制備流程。無菌動物在自然界并不存，必須用人為的方法養育而成。一般將臨產前的健康動物用麻醉藥品或拉斷頸椎處死后，立即浸泡在37℃滅菌液中，送進無菌室（或無菌隔離器），按無菌手術進行剖腹，切除帶胎子宮（子宮內首先應無菌），將其浸入消毒液里并立即輸送到另一只隔離器中，切開子宮取胎，經用滅菌紗布揩拭仔體并斷臍（電刀切斷）后，放入隔離器內人工喂乳或用其他品系的無菌雌鼠作保姆代養。象小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻煩，故采用保姆代養。而象豚鼠因在一定程度上能自力飲乳，故人工哺乳較容易。另外，象禽類、魚類、昆蟲類等，因是在卵中無菌的前提下作出的，故用藥物將卵周圍滅菌后移入滅菌隔離器內使其孵化即可，而且，這些動物，一般在出生后就能自力采食，故較易育成。
無菌動物的理論基礎和實踐依據在于胎盤屏障和屏障觀念，根據這個基礎開展了無菌動物工作。在無菌條件下取仔，一切操作在無菌隔離器內進行。

實驗步驟

小動物作子宮切除術（Hysterectomy）；大動物做子宮切開術（Hysterotomy）獲得幼仔。子宮切開對兔子可用三次，但易污染，不如子宮切除術取仔安全。大動物主要從經濟角度考慮，采用子宮切開取仔術。取仔程序如下：
1. 腹部剃毛或用硫化鈉脫毛劑脫毛。
脫毛劑配制：
硫化鋇50克
濕潤劑4克
甘油10克
水50毫升
作成類糊狀用以脫毛。
2. 處死妊娠雌鼠。一般不用化學藥品處死，以兔影響胎鼠。如用化學藥品時，應使劑量對胎體無影響時方可使用。一般對小鼠用斷頸髓處死。較大的動物如豚鼠用氟烷（HalothaneOxygen）吸入麻醉，不用乙醚麻醉。
3. 處死的雌鼠浸泡于37℃滅菌液中2分鐘。滅菌液配制：
福爾馬林20%
季銨5%
芐烷氨水75%
4. 將妊娠鼠固定住，并于腹部粘上滅菌膠布。
5. 剖腹。
6. 取出子宮：
1) 將子宮放入滅菌液中，之后將盛子宮的小筐遞到另一隔離器中取胎鼠。這樣，在隔離器中有充分的時間檢查其是否污染。
2) 如將子宮直接在無特定病原體條件下取胎和飼養則有危險，可能受染而無機會觀察。
7. 用剪刀剪開子宮壁，取出胎鼠，輕按以幫助呼吸，不立即斷臍，待呼吸正常時再用電刀切斷臍帶。
8. 分開胎盤，將取出的幼仔放到代乳母鼠身邊，把代乳母鼠的幼仔取出與剖腹產取出的幼鼠接觸，使之有同樣的氣味，便于代養。
9. 剖腹取胎的時限。
1) 小鼠：9-10分鐘；
2) 豚鼠：5分鐘，因豚鼠耐缺氧能力低弱。
乳汁制備：首先用擠奶機獲得兔奶，冷凍干燥，經γ射線消毒，保存于塑料袋中，貯放在隔離器內。需用時將奶粉加水恢復干燥前的濃度，不加維生素和其他成份。須注意人工喂養經常出現因灌喂入肺而致死。家兔3次/日，后來發現1次/日即可。根據家兔年齡及體重考慮每兩日加量1次。第1天喂5毫升，可維持1次/日；以后逐漸增加到4-5次/日；第3周時即可吃飼料。