嗜堿性粒細胞脫顆粒試驗

實驗概要

嗜堿性粒細胞不僅參與速發型超敏反應，而且參與機體抗腫瘤免疫應答。檢測嗜堿性粒細胞的功能有助于過敏性疾病的診斷和腫瘤的預后判斷。本文進行了嗜堿性粒細胞脫顆粒試驗，對嗜堿性粒細胞的功能進行了檢測。

主要試劑

1. Hanks液

2. Alcian藍染液

實驗材料

新鮮的抗凝血(用0.1mol/L pH7.7 EDTA抗凝血)

實驗步驟

1. 分離的嗜堿性粒細胞，用Hanks液洗2次，每次1500r/min離心10min；

2. 吸去上清液，留約0.3ml沉淀，輕輕振搖使細胞重懸；

3. 取過敏原50μl，與細胞懸液50μl混合，放置37℃水浴30min，以同量緩沖液代替過敏原作為對照管；

4. 加Alcian藍染液150μl，混勻，置15～25℃過夜。次日計數9大方格內染成藍色的嗜堿性粒細胞數(F)。

注意事項

1. 檢測對象必須明確。應在無急性發作，停用抗組胺藥，糖皮質激素，塞吡酮，茶堿類和β-興奮劑3d后采血。采血當天禁脂肪類飲食。正常對照應無過敏史，與測定組同時采血和檢測。

2. 全過程需要無菌操作。

3. 過敏原的種類繁多，應根據地區和季節的不同，結合臨床資料，合理選擇。同時還應選擇合適濃度。

4. 抗IgE及甘露醇是常用的刺激原。其中馬抗人IgE的濃度以1ng/ml最佳。如改用其他批號的抗IgE，應選擇最佳應用濃度后方可使用。甘露醇用來代替重水(D₂O)作為刺激原與D₂O的陽性符合率為89.66％，其配制法如下：用18％甘露醇代替蒸餾水，配制HEPES-ACM緩沖液，調整其滲透壓與90％D₂O相同(1380mosn/kg H₂O)。該溶液在常溫下易析出結晶，應無菌分裝，使用前于56℃水浴融化結晶，冷至室溫后使用。