噬菌體是感染細菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的細菌病毒的總稱，作為病毒的一種，噬菌體具有病毒特有的一些特性：個體微小；不具有完整細胞結構；只含有單一核酸。噬菌體基因組含有許多個基因，但所有已知的噬菌體都是在細菌細胞中利用細菌的核糖體、蛋白質合成時所需的各種因子、各種氨基酸和能量產生系統來實現其自身的生長和增殖。
| 實驗材料 | 噬菌體 |
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| 試劑、試劑盒 | LB頂層瓊脂糖氯仿SMMgSO4 |
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| 儀器、耗材 | 培養箱牙簽硝酸纖維素膜 |
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| 實驗步驟 | 1. 在直徑82 mm LB平極上倒入含200 μl 宿主菌的3 ml 0.7%頂層瓊脂糖，放置10 min。 2. 通過放射自顯影膠片上的雜交斑點確定陽性噬斑在原平板上的位置，用牙簽輕輕插入斑中。
3. 然后接種到步驟1制備的次級平板的頂層瓊脂糖中，此牙簽在平板上接連插30~40下。 4. 或用吸管插入陽性噬斑的位置，取一小塊環形瓊脂糖轉入1 ml SM中。
5. 加入1滴氯仿，放置1~2 h，滴定，制備3~6個平板，每個平板的噬斑數應小于500個。
6. 次級平板置37℃過夜培養，將噬菌斑影印到硝酸纖維素濾膜上。
7. 再依次處理、雜交、洗膜和曝光，然后在次級平板上找出對應的陽性噬菌斑。
9. 對每個克隆，將牙簽插入雜交信號最強的噬菌斑中，并在1 ml SM中放置5 min。
10. 將1 μl 噬菌體貯存液。1 μl 和10 μl 1：100稀釋液鋪三級平板。
11. 按以上步驟篩選第三級平板上的噬斑。
12. 重復這一純化過程，直至獲得純的噬斑為止，并將純的噬菌體保存在SM中。 |
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