實驗材料 噬菌體
試劑、試劑盒 LB頂層瓊脂糖氯仿SMMgSO4
儀器、耗材 培養箱牙簽硝酸纖維素膜
實驗步驟
1. 在直徑82 mm LB平極上倒入含200 μl 宿主菌的3 ml 0.7%頂層瓊脂糖，放置10 min。
2. 通過放射自顯影膠片上的雜交斑點確定陽性噬斑在原平板上的位置，用牙簽輕輕插入斑中。
3. 然后接種到步驟1制備的次級平板的頂層瓊脂糖中，此牙簽在平板上接連插30~40下。
4. 或用吸管插入陽性噬斑的位置，取一小塊環形瓊脂糖轉入1 ml SM中。
5. 加入1滴氯仿，放置1~2 h，滴定，制備3~6個平板，每個平板的噬斑數應小于500個。
6. 次級平板置37℃過夜培養，將噬菌斑影印到硝酸纖維素濾膜上。
7. 再依次處理、雜交、洗膜和曝光，然后在次級平板上找出對應的陽性噬菌斑。
9. 對每個克隆，將牙簽插入雜交信號最強的噬菌斑中，并在1 ml SM中放置5 min。
10. 將1 μl 噬菌體貯存液。1 μl 和10 μl 1：100稀釋液鋪三級平板。
11. 按以上步驟篩選第三級平板上的噬斑。
12. 重復這一純化過程，直至獲得純的噬斑為止，并將純的噬菌體保存在SM中。