噬菌體效價的測定

實驗方法原理

噬菌體的效價就是 1 ml 培養液中所含活噬菌體的數量。效價測定的方法，一般應用雙層瓊脂平板法。由于在含有特異宿主細菌的瓊脂平板上，噬菌體產生肉眼可見的噬菌斑，因此，能進行噬菌體的計數，但因噬菌斑計數方法其實際效率難以接近 100％（—般偏低，因為有少數活噬菌體可能未引起感染），所以為了準確地表達病毒懸液的濃度（效價或滴度）一般不用病毒粒子的絕對數置而是用噬菌斑形成單位（plague-forming units， 簡寫成 pfu）表

實驗材料 大腸桿菌

試劑、試劑盒 肉膏蛋白胨瓊脂平板液體培養基的小試管含瓊脂培養基的試管

儀器、耗材 滅菌小試管滅菌吸管48℃ 水浴箱

實驗步驟

1. 稀釋噬菌體

1.1 將 4 管含 0.9 ml 液體培養基的試管分別標寫 10-3，10-4，10-5，和 10-6。

1.2 用 1 ml 無菌吸管吸 0.1 ml 10-2 大腸桿菌噬菌體，注入 10-3 的試管中，旋搖試管，混勻。

1.3 用另一支無菌吸管從 10-3 管中吸 0.1 ml 加入 10-4 管中，混勻，余類推，稀釋至 10-6 管。

2. 噬菌體與菌液混合

2.1 將 5 支滅菌空試管分別標寫 10-4，10-5，10-6，10-7 和對照。

2.2 用吸管從 10-3 噬菌體稀釋管吸 0.1 ml 加入 10-4 的空試管內，用另一支吸管從 10-4 稀釋管內吸 0.1 ml 加入 10-5 空試管內，直至 10-7 管。

2.3 將大腸桿菌培養液搖勻，用吸管取菌液 0.9 ml 加入對照試管內，再吸 0.9 ml 加入 10-7 試管，如此從最后一管加起，直至 10-4 管，各管均加 0.9 ml 大腸桿菌培養液。

2.4 將以上試管旋搖混勻。

3. 混合液加入上層培養基內

3.1 將 5 管上層培養基溶化，標寫 10-4，10-5，10-6，10-7 和對照。使冷卻至 48℃，并放入 48℃ 水浴箱內。

3.2 分別將 4 管混合液和對照管對號加入上層培養基試管內。每一管加入混合液后，立即旋搖混勻。

4. 接種了的上層培養基倒入底層平板上

4.1 將旋搖均勻的上層培養基迅速對號倒入底層平板上，放在臺面上搖勻，使上層培養基鋪滿平板。

4.2 凝固后，置 37℃ 培養。

5. 觀察平板中的噬菌斑，將每一稀釋度的噬菌斑形成單位記錄于實驗報告表格內，并選取 30～300 個 pfu 數的平板計算每毫升未稀釋的原液的噬菌體數（效價）。

噬菌體效價＝pfu 數×稀釋倍數×10