實驗材料 噬菌體
試劑、試劑盒 MgSO4麥芽糖瓊脂糖氯仿DMSOSM
儀器、耗材 離心機分光光度計水浴鍋
實驗步驟
1. 制備鋪平板菌
（1）2.5 ml 新鮮過夜培養的宿主菌液接種于250 ml 含0.2%麥芽糖和10 mmol/l MgSO4的LB培養液中。
（2）在37℃恒溫搖床劇烈搖蕩2~4 h，培養液中菌懸液濃度OD600達到0.5左右。
2. 將裝有文庫的微量離心管在離心機上稍加離心，以便與氯仿分開。
3. 將已包裝和滴定的噬菌體水相（不含氯仿）加于鋪平板菌中，37℃溫育15 min。
4. 加0.5 ml 噬菌體/宿主菌混合液到8 ml 47℃保溫的頂層瓊脂糖中，混勻后迅速倒在新鮮的37℃保溫的150 mm 的H平極上。
5. 輕輕轉動平板待頂層瓊脂糖鋪勻后再放置5 min 使其凝固，倒扣平板于37℃培養6~7 h 。
6. 從恒溫培養箱中取出所有轉染的平板，分別在每一個平板中加入10 ml SM懸浮培養基，于4℃放置2~16 h。
7. 洗脫噬菌體，然后從所有平板中收集SM并合并到一個玻璃瓶或聚丙烯塑料管中。
8. 以2 800 g 離心5 min，將上清轉移到新的帶Teflon蓋的玻璃試管中，再加入0.5 ml 氯仿，混勻，滴定已擴增的文庫。
其他
用于擴增λ載體文庫的對應大腸桿菌宿主菌株