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  • 發布時間:2020-09-01 15:51 原文鏈接: 噬菌體的鑒定方法和步驟

    1 樣品采集

    將一定的樣品放入滅菌三角瓶中,加入對數生長期的敏感指示菌如大腸桿菌菌液3~5mL,再加20mL二倍肉湯蛋白胨培養液。

    2 增殖培養

    30℃振蕩培養12~18h, 使噬菌體增殖。

    3 離心分離

    將上述培養液以3000rpm離心15~20min, 取上清液,用pH7.0,1%蛋白胨水稀釋至10-2~10-3,用于噬菌體檢查及效價測定。

    4 生物測定法

    4.1雙層瓊脂平板法

    4.1.1 倒下層瓊脂 融化下層培養基,倒平板(約10mL/皿)待用。

    4.1.2倒上層瓊脂

    融化上層培養基,待融化的上層培養基冷卻至50℃左右時,每管中加入敏感指示菌 (大腸桿菌) 菌液0.2mL,待檢樣品液或上述噬菌體增殖液0.2~0.5mL,混合后立即倒入上層平板鋪平。

    4.1.3恒溫培養 30℃恒溫培養6~12h觀察結果。

    4.1.4 觀察結果 如有噬菌體,則在雙層培養基的上層出現透亮無菌圓形空斑──噬菌斑。

    4.2 單層瓊脂平板法

    省略下層培養基,將上層培養基的瓊脂量增加至2%,融化后冷卻至45℃左右,如同上法加入指示菌和檢樣,混合后迅速倒平板。30℃恒溫培養 6~16h后觀察結果。

    4.3離心分離加熱法(快速檢查)

    取大腸桿菌正常培養液和侵染有噬菌體的異常大腸桿菌培養液,4000rpm離心20min,分別取兩組發酵液的上清液(A1),一部分于721分光光度計上測定OD650光密度值,另外各取5mL上清液于試管中,置水浴中煮沸2min(A2),檢測A2溶液OD650光密度值,記錄結果

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