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  • 發布時間:2020-09-07 15:05 原文鏈接: 噬菌蛭弧菌、噬菌體和細菌素(1)

    在流行病學和細菌學的研究中,噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus,簡稱蛭弧菌)、噬菌體、細菌素的研究及其應用已越來越引起人們的關注。蛭弧菌、噬菌體、細菌素是分屬于細菌、病毒、抗菌物質3種不同的有機物,但它們有許多相似的生物特性,而且往往引起人們產生錯誤的概念。

    蛭弧菌是一類專門以捕食細菌為生的寄生性細菌,它比通常的細菌小,有噬菌體、細菌素的作用,且具有細菌的特性。其宿主范圍廣泛,對大部分陰性菌都有裂解作用,敏感性較高,特異性不強,但作用方式類似噬菌體和細菌素。蛭弧菌繁殖一代需4~6h,每次可復制6~36個子代細胞。蛭弧菌可以在死菌上生長而與噬菌體、細菌素有別。蛭弧菌的作用可吸附到宿主細胞上并進入宿主細胞內,在其中生長繁殖。最終導致宿主菌裂解。


    噬菌體是一類細菌特異性的病毒,它有典型的病毒形態和結構。噬菌體對宿主有高度的特異性,噬菌體的宿主范圍是鑒別菌株的一個有用的特性,但并不是一個不變的特性。噬菌體的作用方式,是以尾鞘吸附到宿主細胞特定的受點上,向菌體內注射RNA,并在菌體內復制子代,最終類似蛭弧菌溶解宿主的方式,釋放子代。噬菌體不能在停止新陳代謝的宿主內生長繁殖。

    細菌素是細菌產生的一類抗菌物質,也是一種具有抑制細菌活性的高分子蛋白質類物質。但其抑制作用范圍比較窄,只對產生細菌素菌株有近緣的相應的受體菌才有抑制作用,和噬菌體一樣具有較強的特異性。細菌素在作用方式上與噬菌體、蛭弧菌相似,但細菌素不能繁殖,對蛋白酶敏感等與蛭弧菌、噬菌體有別。細菌素吸附在敏感菌株的細胞上將其殺死,但不象蛭弧菌、噬菌體一樣引起菌細胞溶解。


    本文就蛭弧菌、噬菌體、細菌素的檢測方法、形態結構、理化特性、化學組成、作用機理以及其應用范圍等異同性作一系統闡述。

    一、檢測方法

    (一)蛭弧菌的檢測

    蛭弧菌的檢測方法及其計數與噬菌體、細菌素所采用的雙層瓊脂平板是一致的,所不同的是蛭弧菌所利用的宿主菌是經過洗滌的濃縮菌液(400億/ml)。培養基采用自來水雙層瓊脂,不需加入特殊的營養成份。在自來水雙層瓊脂的上層中加入濃厚的宿主菌,此時平板呈半透明背景,蛭弧菌可在含有敏感宿主菌細胞的雙層瓊脂平板上形成噬菌斑。蛭弧菌在此雙層瓊脂中形成的噬菌斑可隨時間的延長而逐漸的擴大,直至宿主細胞被耗盡。形成噬菌斑的時間一般為40~48h。但在死菌上蛭弧菌形成噬菌斑的時間可提前到14~16h。蛭弧菌在死菌中形成的噬菌斑數目是活菌的35~290倍。在噬菌體、細菌素的增殖中無這些現象的報道。蛭弧菌在營養瓊脂平板中形成噬菌斑。蛭弧菌的最適生長溫度為25~30℃。

    (二)噬菌體的檢測

    噬菌體的分離可用平板接種法或肉湯培養物的裂解法。噬菌體的測定目前已普遍采用雙層瓊平板法。在這些方法中所采用的宿主菌均為新陳代謝中的細菌,一旦宿主菌停止新陳代謝,則噬菌體的生長繁殖同時停止。噬菌體的生長溫度為37℃。用檢查噬菌體和細菌素的方法,蛭弧菌則不能生長形成噬菌斑,反之用檢查蛭弧菌的方法檢查噬菌體,也不能形成噬菌斑。

    平板接種效率是檢測噬菌體顆粒在接種平板后實際形成噬菌斑的比例數的常用方法。它取決于噬菌體顆粒吸附敏感宿主細胞的能力和被感染宿主釋放噬菌體的能力。影響平板接種效率的因素很多,如培養物中死菌的存在,以及培養基的成份等。

    (三)細菌素的檢測

    檢測細菌素的方法和噬菌體基本相同。把敏感菌株培養物種在平板表面,然后將產生細菌素的細菌培養物或其產物接種在上面,37℃24h后可形成抑菌區。交叉劃線法和三層瓊脂法檢測細菌素也是理想的方法。細菌素分型常采用已知的細菌素對待檢菌的檢測。細菌素產生菌及敏感菌的篩選可采用交互作用的方法。把其菌株既作為細菌產生株,又作為敏感菌,配對檢測細菌素的活力單位,在標準條件下,細菌素使敏感菌在瓊脂上呈現清晰的抑制生長區域的最高稀釋度為一個細菌素活力單位。對不同種和不同型的細菌素,其活力差別很大。

    二、形態和結構

    (一)蛭弧菌的形態與結構

    蛭弧菌革蘭染色呈陰性弧桿菌,相差顯微鏡下,可見呈跳躍式的運動。電鏡觀察,蛭弧菌以弧、桿狀為主。其菌體長約0.8~1.2nm。胞漿常可觀察到致密小體,長約150~300nm,寬為70~120nm,呈片狀結構。核區非常明顯,周圍包繞著數個核糖體顆粒。在蛭弧菌中還可見到間體及其他許多內含物質,有人認為間體的存在與蛭弧菌附著宿主菌有關。

    蛭弧菌鞭毛結構是獨特的,它由鞭毛鞘和軸心組成,鞘壁厚約7.5nm,軸心直徑約為13nm。蛭弧菌鞭毛的結構與其它革蘭陰性菌的鞭毛結構基本相似,但未發現鞭毛基部有類似于其它革蘭陰性鞭毛基部所具有的L環結構。


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