一、穿刺保存
1. 在一個耐高壓的帶有橡皮塞或Teflon蓋的氣密性小瓶中加人2/3體積穿刺培養基。
2. 挑取一個單菌落，反復將接種環深刺人瓊脂中。
3. 擰松蓋子，于37 °C培養（8~12 h ）直到在穿刺孔跡中的細菌生長至可見的霧狀。
4. 擰緊蓋子于15~22 °C存放于暗處。
5. 按以下方法復蘇菌株
用一支無菌接種環挑取一些帶有細菌的瓊脂，然后涂布于LB平板上并劃線以得到單菌落。
二、冷凍保存
1. 將2 ml對數生長中期培養液或1 ml新鮮飽和的培養液加人到一穿刺小瓶或Nunc小瓶中，這些小瓶中已裝有1 ml甘油溶液或含7%二甲基亞砜（DMSO）。
最好使用反應級別或分光光度學級別的DMSO作為凍存液，因為這樣的試劑在存儲時通常蓋得很嚴實。
2. 保存于 -20°C或 -70°C。
于-70°C保存時，大多數菌株可保持更長的存活時間。
3. 復蘇時，用一無菌牙簽或吸管刮取固體冰碴片，然后在LB平板上劃線。仔細操作不要讓其融化。
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