固相微萃取GCMS／MS方法應用（二）

6．2 內標化合物

6.2.1 香豆素（5,6,7,8-D4），濃度為100 μg/mL的丙酮溶液

（Ehrenstorfer博士提供）

6.1.2 二環己基甲醇，純度98%（Sigma-Aldrich）

7． 標準物質制備

7．1 調味劑的標準儲備液（1000 μg/mL）：稱取25.00 mg調味劑化合物（根據標準物質的實際純度重新計算用量）加入容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至25 mL。該溶液可在4°C至少保存3個月。

7．2 七種調味劑的工作標準溶液（1 μg/mL，對香豆素濃度為10 μg/mL）：分別移取25 μL 濃度為1000 μg/mL的側柏酮、薄荷呋喃、草蒿腦、胡薄荷酮、甲基丁子香酚和β-細辛腦儲備液，和250 μL 濃度為1000 μg/mL的香豆素儲備液于25 mL容量瓶中，加入水稀釋至刻度線（得到10 μg/mL的香豆素工作液；其他6種為1 μg/mL）。工作標準溶液需要每次使用前現配。

7．3 內標化合物二環己基甲醇的標準儲備液（1000 μg/mL）：稱取25.00 mg化合物（根據標準物質的實際純度重新計算用量）加入容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至25mL。該溶液可在4°C至少保存3個月。

7．4 內標化合物二環己基甲醇的工作標準溶液（10 μg/mL）：移取100 μL 濃度為1000 μg/mL的二環己基甲醇的標準儲備液至10 mL容量瓶中，加入水稀釋至刻度線。工作標準溶液需要每次使用前現配。

8.儀器

9. 消耗品

10.分析流程

儀器準備：在使用儀器前或準備用SPME模式進行分析工作前，請仔細閱讀Thermo Scientific TriPlus儀器操作指南的相關章節和Thermo Scientific TriPlus標準操作流程的第IV部分內容。其描述了在SPME手柄和萃取頭安裝過程中所有必需的維護注意事項。

10.1 樣品制備

固體或半固體基質樣品

10.1.1 將150 g樣品在高速攪拌機（適用于湯羹、醬汁、蒜醬）或威力實驗攪拌機（適用于固體基質，如牛奶什錦早餐）中攪拌5 min，得到均勻的樣品。然后準確稱取0.1 g 3樣品直接放入頂空樣品瓶中。

10.1.2 使用合適的微量移液器分別移取10 μL二己基甲醇的工作標準溶液、10 μL香豆素-d4的標準溶液和9980 μL水加入頂空樣品瓶中。液體基質樣品

10.1.3稱取0.1 g樣品直接放入頂空樣品瓶中，并使用合適的

微量移液器移取10 μL二己基甲醇的工作標準溶液、10μL香豆素-d4的標準溶液和9980 μL水加入頂空樣品瓶中。

10.1.4 上述兩種情況下都需要加入2.5 g NaCl, 并使用帶PTFE/丁基橡膠隔墊的樣品蓋和樣品鉗蓋緊樣品瓶。

10.1.5使用下列空白食品代表性每類基質進行空白校正。

?液體基質樣品（主要指酒類）的空白樣品：40 %的乙醇水溶液。

?半固體基質樣品（主要指醬汁和蒜醬）的空白樣品：純番茄醬汁。

?固體基質樣品（主要指牛奶什錦早餐）的空白樣品：燕麥粥。

?對于固體和半固體基質樣品，標準溶液和內標樣品的

用量見表1，對于液體基質樣品其對應的標準溶液和內標樣品用量見表2。

10.2 SPME自動化分析

10.2.1 使用涂覆100 μm的聚二甲基硅氧烷纖維(PDMS-100)，并按照生產廠商推薦的方法將纖維插入GC進樣器，預處理備用。

10.2.2將含測試樣品的頂空樣品瓶放置在樣品托盤中（最大可放置54 個樣品瓶），并加載SPME自動進樣器。

10.2.3 開始SPME分析程序。其操作程序為：在50℃條件下將樣品旋轉（液體形成漩渦）5 min，將纖維頭插入樣品瓶的頂部空間，并在溶液漩渦條件下于50℃萃取40min；然后將纖維轉移至進樣口并于250 ℃脫附5 min。該程序結束后，將纖維頭轉移到第二個進樣口（取代老化平臺）進行清洗并于250 ℃老化處理5 min。

10.3 GC分析

GC分析工作在帶自動SPME分析系統的TRACE GC Ultra?儀器系統上進行（Thermo Fisher Scientific, Austin, TX USA）。GC分析條件為：

色譜柱：TraceGOLD TG-5MS， 5% 二苯基和95%二甲基聚硅氧烷為固定相（30 m長，內徑0.25 mm，膜厚0.25μm)

進樣模式：不分流

進樣口溫度：250 ℃

左側載氣流量：1.2 mL/min

分流量：50 mL/min

不分流時間：3 min

老化進樣口溫度：250℃

右側載氣流量：0.1 mL/min

傳輸管線溫度：250℃

爐溫：60℃保持1 min, 以15℃/min加熱到120℃，保持2 min；

再以30℃/min加熱至280℃保持10 min。