固相萃取法用于大豆中取代脲類農藥殘留量的測定

　　1 前言

　　20世紀50年代初發現了滅草隆的除草作用后，此類除草劑的許多品種相繼出現，特別是在60～70年代期間，開發出一系列的鹵代苯基脲和含氟脲類除草劑，提高了選擇性，擴大了殺草譜，在農業生產中被廣泛地應用。我國20世紀60年代以來，研制了除草劑1號、敵草隆、綠麥隆、殺草隆、異丙隆等品種，在推廣化學除草中起了重要的作用。本文用SPE400全自動機械臂固相萃取儀對大豆中取代脲類除草劑的整個檢測過程中的凈化環節進行了實驗。

　　2 儀器與試劑

　　2.1 儀器

　　SPE400全自動機械臂固相萃取儀、液相色譜-質譜聯用儀、粉碎機、離心機、勻漿機、氮吹儀、425um網篩

　　2.2 試劑及耗材

　　乙腈、氯化鈉、0.22um的微孔濾膜，HLB固相萃取小柱（6ml，填充物500mg）

　　3 實驗方法

　　3.1 實驗步驟

　　3.1.1 取樣

　　取代表性大豆樣品500g用粉粹機粉粹后，全部過425um的標準網篩，混勻備用。

　　3.1.2 提取

　　稱取5g試樣（精確至0.01g）于50mL具塞離心管中，加入10mL水，混勻后放置1h。加入過量氯化鈉，使水溶液達到飽和，再加入15mL乙腈高速均質提取3min，5000r/min離心5min，將乙腈層轉移至25mL容量瓶中。殘渣再用10mL乙腈重復提取一次，合并提取液，并用乙腈定容至25mL。取5mL提取液于15mL離心管中，45℃下氮氣吹至2mL待凈化。

（樣品提取液）

　　3.1.3固相萃取小柱凈化

　　將收集的洗脫液置于45℃下氮氣流吹至近干。用乙酸-甲醇（7+3）溶液定容于1mL，旋渦混勻后過0.22um的微孔濾膜，供液相色譜-質譜分析備用。

　　3.1.4 液相色譜測定條件

　　色譜柱：ACQUITY BEH C18色譜柱，50m*2.1mm（內徑），膜厚1.7um，或相當者；

　　柱溫：40℃；

　　進樣量：10uL；

　　流動相及梯度洗脫條件見下表：

流動相及梯度洗脫條件

　　3.1.5 質譜測定條件

　　離子化模式：電噴霧電離正離子模式（ESI+）；

　　掃描方式：正離子掃描；

　　檢測方式：多反應監測（MRM）；

　　分辨率：單位分辨率；

　　3.1.6 色譜測定與確證

　　每種被測組分選擇1個母離子，2個以上子離子，在相同實驗條件下，樣品中待測物質的保留時間，與基質標準溶液的保留時間偏差在±2.5%之內；且樣品中各組分定性離子的相對豐度與濃度接近的基質混合標準工作溶液中對應的定性離子的相對豐度進行比較，偏差不超過表2規定的范圍，則可判定為樣品中存在對應的待測物。

　　在儀器最佳工作條件下，對基質混合標準工作溶液進樣，以峰面積為縱坐標，基質混合標準工作溶液濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中待測物的響應值均應在儀器測定的線性范圍內。

定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

　　3.1.7 空白實驗

　　 除不加試樣外，均按上述測定步驟進行。

　　4 結果與討論

　　4.1 國標要求上樣過程的流速為1滴/s。

　　4.2 上樣開始收集全部流出液，約8mL。

　　4.3 洗脫液流出后需要抽干固相萃取柱。

　　4.4 用固相萃取法凈化大豆中取代脲類農藥殘留量的過程實現自動化處理，減少人力的消耗，實驗過程中使用的有機溶劑采用密封處理，降低了對人體的傷害且儀器能精準的控制活化、上樣、洗脫等溶劑流速，使樣品凈化的更為充分。

　　參考文獻

　　[1] GB 23200.35-2016 食品安全國家標準 植物源性食品中取代脲類農藥殘留量的測定 液相色譜-質譜法

　　注意事項

　　1、將5mL上層乙腈層直接放入樣品管內濃縮，避免了樣品轉移過程中樣品的損失。

　　2、上樣后應當對樣品管進行2次潤洗。

　　3、目標物洗脫時將儀器空氣助推增加至5mL，使殘留在柱內的洗脫液完全流出。

　　4、實驗中用到有毒有害試劑，應當于通風櫥內進行，同時實驗人員需做好防護措施。