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  • 發布時間:2021-02-23 22:49 原文鏈接: 國產vs進口,熒光定量PCR預混液真實測評

      實時熒光定量PCR(real-time qPCR)實驗在分子生物學研究中越來越普遍。現在常用兩種熒光定量方法:SYBR Green I嵌合熒光染料法,和TaqMan探針法。染料法成本較低,使用方便,是最常用的熒光定量方法;探針法成本較高,但是定量結果更準確。

      朗基Q2000型熒光定量PCR系統(熱線:13066324063)

      挑選一款質量好的擴增產品對于實驗結果有至關重要的作用。新手們對于如何判斷一款qPCR預混液的好壞有點迷茫,常常會出現一個誤區:擴增效率越高越好。

      為什么不是效率越高越好?產物的特異性怎么判斷?國產品牌和進口品牌的差距在哪里?通過下面的實驗就可以看出來。

      測評開始

      5種品牌的TaqMan探針法熒光定量PCR預混液,同時用相同的模板DNA和引物進行擴增。擴增曲線如下:

      可以看出擴增曲線都正常,除了國產品牌C的Ct值較大,即擴增效率較低外,其余4個品牌的Ct值均接近。但是它們真實地反映了目標產物的實時擴增情況嗎?

      我們對以上qPCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳,根據產物大小可以直觀地判斷其特異性:

      品牌A和品牌D的產物存在明顯的非特異性擴增;品牌C的產物大小不正確,完全是非特異性擴增;東盛生物(一款探針法和兩款染料法)和品牌B的產物是特異的。

      通過對比我們發現,擴增效率不是越高越好,產物特異才是最重要的!

      首次使用的引物,不論是進行染料法定量的,還是探針法定量的,都建議通過DNA電泳來直觀判斷其特異性。當然,染料法定量的特異性也可以借助熔解曲線來判斷。

      以上只是我們對比測評的一組結果,綜合多次、多品牌、多類型的對比結果,從整體水平來看,進口大牌的qPCR預混液比國產品牌質量更可靠,但也不是全部都表現很好。

      東盛生物qPCR Mix不斷優化升級,與眾多國際品牌對比均表現突出。

      文章鏈接:中國儀器批發網 http://info.china17pf.com/newsdetail/2893.html


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