介紹
RFect小核酸轉染試劑是國際知名科學家崔坤元博士領導我公司研發團隊在美國西雅圖實驗室研發成功的一種新型的小核酸轉染試劑。RFect可用來轉染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以內的小分子RNA和DNA，轉染細胞包括絕大多數貼壁生長的細胞，如一般細胞株、腫瘤細胞株等。目前，無論國外還是國內，轉染試劑的主要成分均為脂質體或聚乙烯亞胺(Polyethylenimine, PEI)，這兩種成分都具有很大的細胞毒性，并且轉染效果不好。RFect采用新型的動物源性的納米材料，毒性很低并且擁有非常卓越的轉染性能。與其它品牌的小核酸轉染試劑相比，RFect的細胞轉染陽性率一般在90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在95%以上，而其它品牌轉染試劑的細胞轉染陽性率一般不超過70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超過75%。RFect細胞毒性很低，轉染細胞死亡率不到10%，而其它品牌試劑的轉染細胞死亡率一般在30%以上。血清對轉染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養液。有關RFect 小核酸轉染試劑的材料合成和試劑配制我們已申請了國際ZL，并通過PCT覆蓋國際上多個國家和地區。
操作步驟：本說明書適用于24孔培養板的轉染實驗，其他規格的培養板的用量參照下面表格，表格給出的是每孔的用量與體積。
A. 細胞接種：轉染前一天接種細胞，每孔 500 μl 培養基（不可加抗生素），使細胞在轉染時密度在30-50% 。
B. siRNA-RFect混合物準備：
6pmol siRNA 用50μl無血清培養基稀釋。
2μl RFect用50μl無血清培養基稀釋。輕輕混勻，室溫孵育5min。注意：確保在25 min內執行第三步操作，不要過于延遲。
孵育5min后，將siRNA 稀釋液與RFect 稀釋液混合（總體積100μl）。輕輕混勻，室溫孵育20 min。
C. 將混合物加到培養的細胞內（完全培養基培養）：
將100μl混合物加入培養孔內，培養孔內含有0.5ml培養的細胞。輕輕晃動培養板，混勻。
37°C培養18-72h，檢測基因抑制效果。如果需要，細胞培養4-6h時可以更換培養基，但不是必須。孵育時間的長短，取決于細胞類型、
所干擾基因本身及分析方法。可設置不同的孵育時間進行實驗以確定最佳孵育時間。
轉染實驗要點：
轉染過程不可添加抗生素，否則會導致細胞死亡；
首次實驗siRNA的用量可稍大（一般10 nM） ，后續實驗根據實驗結果修改。
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RFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels |
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Culture vessel |
Surface area/well (cm2) |
Vol. of growth medium (μl) |
Vol. of dilution medium (μl) |
siRNA Amount (pmol) |
RFect (μl) |
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96-well |
0.3 |
100 |
2 x 10 |
1.2 |
0.4 |
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48-well |
0.8 |
250 |
2 x 25 |
3 |
1 |
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24-well |
2 |
500 |
2 x 50 |
6 |
2 |
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12-well |
4 |
1000 |
2 x 100 |
12 |
4 |
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6-well |
10 |
2500 |
2 x 250 |
30 |
10 |
轉染實驗優化: 為了提高轉染效率，最好對轉染條件進行優化，特別是首次使用。例如：24孔培養板，調整 siRNA與RFect試劑的用量。siRNA 用量在0.6-30 pmol(final concentration 1- 50 nM)之間調整，RFect試劑用量在1.0 - 3.0μl之間調整。客戶可按照習慣用量進行預實驗，如實驗結果不理想，可適當調整并摸索轉染試劑用量。
儲存和運輸
藍冰運輸，4°C 保存，長期不用于-20°C 儲存，避免反復凍融
有效期
-20℃保存條件下，有效期為1年
質量控制
本產品經嚴格的質量檢驗證明，無生物污染
注意：本產品僅用于科研實驗