色譜法又稱色層法或層析法，是一種物理化學分析方法，它利用不同溶質(樣品)與固定相和流動相之間的作用力(分配、吸附、離子交換等)的差別，當兩相做相對移動時，各溶質在兩相間進行多次平衡，使各溶質達到相互分離。
色譜法的分類方法很多，通常是根據流動相的狀態將色譜法分成四大類(表3-2）
1．基本原理
色譜法，又稱層析法。根據其分離原理，有吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜等方法。
吸附色譜是利用吸附劑對被分離物質的吸附能力不同，用溶劑或氣體洗脫，以使組分分離。常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚酰胺等有吸附活性的物質。
分配色譜是利用溶液中被分離物質在兩相中分配系數不同，以使組分分離。其中一相為液體，涂布或使之鍵合在固體載體上，稱固定相；另一相為液體或氣體，稱流動相。常用的載體有硅膠、硅藻土、硅鎂型吸附劑與纖維素粉等。
離子交換色譜是利用被分離物質在離子交換樹脂上的離子交換勢不同而使組分分離。常用的有不同強度的陽離子與陰離子交換樹脂，流動相一般為水或含有有機溶劑的緩沖液。
排阻色譜又稱凝膠色譜或凝膠滲透色譜，是利用被分離物質分子量大小的不同和在填料上滲透程度的不同，以使組分分離。常用的填料有分子篩、葡聚糖凝膠、徽孔聚合物、微孔硅膠或玻璃珠等，可根據載體和試樣的性質，選用水或有機溶劑為流動相。
色譜所用溶劑應與試樣不起化學反應，并應用純度較高的溶劑。色譜時的溫度，豫氣相色譜法或另有規定外，是指在室溫下操作。
分離后各成分的檢出，應采用各單體中規定的方法。通常用柱色譜、紙色譜或蕁層色譜分離有色物質時，可根據其色帶進行區分，對有些無色物質，可在245～365 nm的紫外燈下檢視。紙色譜或薄層色譜也可噴顯色劑使之顯色。薄層色譜還可用加有熒光物質的薄層硅膠，采用熒光熄滅法檢視。用紙色譜進行定量測定時，可將色譜斑點部分剪下或挖取，用溶劑溶出該成分，再用分光光度法或比色法測定；童可用色譜掃描儀直接在紙或薄層板上測出。柱色譜、氣相色譜和高效液相色譜可習接于色譜柱出口處的各種檢測器檢測。柱色譜還可分部收集流出液后用適宜方法翼定。柱色譜法所用色譜管為內徑均勻、下端縮口的硬質玻璃管，下端用棉花或玻葺纖維塞住，管內裝有吸附劑。色譜柱的大小，吸附劑的品種和用量，以及洗脫時西流速，均按各單體中的規定。吸附劑的顆粒應盡可能保持大小均勻，以保證良好的分離效果，除另有規定外通常多采用直徑為0．07～0．15mm的顆粒。吸附劑的活性或吸附力對分離效果有影響，應予注意。