在微量滴定板中進行可溶性SCFv ElISA
[器材和試劑]
● 9E10單抗(SantaCruzBiotech)
●
● ／0．1％Tween 20(／Tween)
● 4％M
● 抗小鼠HRP標記抗體(例如Sigma目錄號A2554)
● 含有抗體片段的上清
[方法]
1．按每孔100pl蛋白抗原包被微量滴定板，4℃過夜。中10ug／m1的濃度是包被抗原的標準濃度。但有時需要更高的濃度或者不同的包被緩沖液(比如碳酸鹽緩沖液)。
2．棄去抗原液并用洗滌板孔2次。
3．加入200gl的2％M封閉每個板孔，37℃孵育2小時。
4．用洗滌板孔3次。
5．每孔加入50ul的4％M。
6．每孔加入50ul含可溶性抗體的培養基上清，用移液器反復吹吸混勻，室溫孵育1小時。
7．棄去溶液，用／Tween洗滌板孔3次，再用洗滌3次。
8．每孔加入100ul 9E10單抗(用2％M按1：1000稀釋)。室溫孵育孔板l小時。
9．棄去溶液，用／Tween洗滌板孔3次，再用洗滌3次。
10．每孔加入抗小鼠HRP(用2％M按1：2000稀釋)。室溫孵育孔板1小時。
11．棄去二抗，并用／Tween和分別洗滌3次。
12．每孔加入100ul TMB系統溶液，并在暗處室溫孵育10～30分鐘。數分鐘內，應呈現藍色。
13．每孔加入50～100ul終止液，終止反應。
14．在450nm處讀板。