培養細胞標記和裂解物的制備實驗——SDS煮沸法

培養細胞

SDS裂解液RIPA校正液免疫沉淀洗液

離心機培養箱玻璃培養管

1.  標記和洗滌細胞（溫和去污裂解法，步驟1~7）。

2a.  對于貼壁細胞：加入適量SDS裂解液至培養皿中。（35 mm 培養皿加0.1 ml，50 mm 培養皿0.25 ml，100 ml 培養皿0.5 ml）立即用橡皮細胞刮于刮下細胞并轉移至帶螺口蓋的微量離心管中。

2b.  對于非貼壁細胞：在旋渦混合器上短暫振蕩細胞沉淀使之松散，加入1 ml SDS裂解緩沖液（毎5×10⁷細胞）后，再次振蕩。

3.  煮沸2~5 min，加入4體積的RIPA正液，充分混勻。

4.  于4℃以26 000 g 離心90 min 或在冷凍離心機上以最大速度離心以回收細胞裂解物。

5.  如常進行免疫沉淀分析，并用免疫沉淀洗液進行洗滌。