摘要發酵液中乙醇含量是實驗室研究和工業生產的必檢項目。應用拉曼光譜在倒置顯微鏡上建立一種
用96 孔板高通量快速檢測發酵液乙醇含量的新方法，通過最小二乘法擬合標準乙醇溶液與內標物的拉曼信號比值，得到回歸方程，根據回歸方程計算乙醇溶液和發酵液中的乙醇含量，與氣相色譜法的檢測結果進行對比。用本方法檢測了菌株篩選、三角瓶發酵和500 L 發酵罐發酵過程的乙醇含量。t-檢驗表明，與氣相色譜法結果吻合較好( p = 0． 05) 。本方法只需要10 ～ 15 s 的拉曼光譜收集時間，應用自編程序實時讀取檢測值，準確度高; 結合96 孔板可以實現大量樣品的實時快速檢測。
隨著化石能源的逐步枯竭，乙醇作為可替代能源成為研究開發熱點。在實驗室研究和工業生產中，發酵液中乙醇含量是必檢項目。傳統的密度瓶法和酒精計法需要將樣品溶液蒸餾后再測定，樣品用量大且操作繁瑣。氣相色譜法［1］、分光光度法［2］、熒光法［3］、紅外光譜法［4 ～ 7］和高效液相色譜法［8］等均可以對乙醇進行定量檢測，但難以實現大量樣品的實時快速檢測，無法滿足乙醇發酵生產過程或菌株篩選過程對乙醇含量實時高通量快速檢測的需要。此外，工業發酵通常是用農副產品淀粉質原料，濃醪發酵，雜質多，發酵液糖質濃度高，對乙醇檢測干擾大。為此，本研究應用拉曼光譜結合96 孔板，以淀粉質原料為發酵基質，建立實時快速高通量檢測發酵液乙醇濃度的新手段。激光拉曼光譜法是一種新的無損檢測技術，可用于乙醇溶液的定性與定量分析［7，9］。在實際測定中拉曼信號的強度會受到來自儀器和樣品的諸多因素的影響。通過內標法可以很好地消除這些因素的影響［10］。
為了減小儀器設備誤差和發酵液中其它物質的干擾，本實驗將內標法適當改進，通過VB 程序對光譜數據進行處理，用最小二乘法擬合標準曲線方程，即時讀出發酵液中的乙醇濃度。本方法分析速度快，樣品使用量少，重復性好，適于大量樣品的快速檢測。