基因合成可應用于：（1）代謝通路合成；（2）基因網絡構建；（3）疫苗設計。
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| 實驗方法原理 | 基因合成是指在體外人工合成雙鏈DNA分子的技術，與寡核苷酸合成有所不同：寡核苷酸是單鏈的，所能合成的最長片段僅為100nt左右，而基因合成則為雙鏈DNA分子合成，所能合成的長度范圍50bp-12 kb。基因合成是用人工方法合成基因的技術，是基因獲取的手段之一，相對于從已有生物中獲取基因來說，基因合成無需模板，因而不受基因來源限制。 |
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| 實驗材料 | DNA |
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| 試劑、試劑盒 | dNTPDAN聚合酶乙醇TE限制性內切核酸酶緩沖液 |
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| 儀器、耗材 | 水浴鍋培養箱 |
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| 實驗步驟 | 1. 將兩種寡核苷酸各1 μg加入微量離心管中，加水至17 μl，再加2 μl 的10×測序酶緩沖液。70℃加熱5 min，然后在合適的退火溫度下保溫5 min，取2 μl 留待以后的分析。
2. 加2μl 4種dNTP混合液和10U測序酶，30℃溫育30min。
3. 70℃ 10min 滅活DNA聚合酶，取2 μl 留待以后的分析。
4. 加10×限制性內切酶反應緩沖液，加水和20——100 U 的適合于克隆的限制性內切酶至100 μl。適當的溫度下消化2 h以上。
5. 酚抽提，加100 μl 4 mol/l 乙酸銨和400 μl的無水乙醇，-70℃沉淀15 min，離心5 min，沉淀重懸于100 μl TE緩沖液，用乙醇再沉淀一次，用95%乙醇洗滌沉淀，干燥，20 μl TE緩沖液溶解，取2 μl用于以后的分析。
6. 用篩分型瓊脂糖凝膠電泳分析確證原材料、延伸產物和酶切產物，估計延伸的寡核苷酸的量，再用適當的載體亞克隆。
7. 對幾個合適的亞克隆測序。
收起 |
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| 注意事項 | 1. 反應液的配制、分裝請一定使用新的（無污染）槍頭、Microtube等，盡量避免污染。
2. 配制反應體系時，應注意移液器的使用方法，所有的液體都要緩慢加至管底，不要加至管壁，所有液體的混勻都要用振蕩器進行，避免產生氣泡。 |
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