2 結果 2.1 重組質粒pVax-DsRed-IRES-EGFP的酶切鑒定 pVax載體是被美國藥品及食物鑒定委員會承認的用于疫苗臨床使用的真核表達載體，它具有卡那霉素抗性，非常適合于人體的應用。制備基因槍子彈之前，先對本室構建保存的真核表達載體pVax-Dsred-IRES-EGFP進行雙酶切鑒定，酶切位點如圖1所示。經NsiI和BssHII雙酶切，切下了大小約為745bp的EGFP片斷；經BamHI和XhoI雙酶切,切下了大小為2131bp的DsRed-IRES-EGFP片斷，結果見圖2。
圖1 重組質粒pVax-DsRed-IRES-EGFP片段及酶切位點圖譜
圖2 pVax-DsRed-IRES-EGFP雙酶切鑒定結果
M:DL2000 1,2:pVax-DsRed-IRES-EGFP經NsiI,BsshII雙切 3,4:pVax-DsRed-IRES-EGFP經BamHI,XhoI雙切 2.2 基因搶子彈制備結果 對于亞精氨、氯化鈣沉淀法制備基因槍子彈的金顆粒與DNA的結合方式問題，國內外文獻均沒有明確報道，本文為了弄清楚上述問題，將亞精氨-氯化鈣沉淀法制備的金顆粒-質粒DNA乙醇溶液稀釋100倍，點樣至云母上，進行原子力顯微鏡掃描，顯示DNA能夠有效包裹在金顆粒上，掃描結果如圖3。 如圖3A所示，金顆粒為表面光滑的圓形，直徑約為1.5um，DNA包裹、纏繞在金顆粒的周圍，使得金顆粒表面變得不再光滑，邊界不再清楚，而呈現出不規則的橢圓形,如圖3B。
圖3 原子力顯微鏡掃描圖 A:金顆粒 B:DNA包裹金顆粒形成的復合物 2.4 基因槍轉染體外培養的cos-7細胞系結果 由于我們在紅綠熒光蛋白片斷間插入了雙順反子表達元件-----內部核糖體進入位點(internal ribosome entry site，IRES) 序列，該序列來源于某些病毒和細胞的mRNA 5′端的一段非翻譯區，因此在上游啟動子的控制下，轉錄后為同一條mRNA；翻譯時，IRES上游基因翻譯起始遵循一般的真核生物基因的翻譯起始規律，而IRES 下游基因則通過IRES 引導核糖體進入，啟始基因的翻譯，從而實現兩個基因的同時表達[6-9]。通過lipofectaine2000瞬時轉染體外培養細胞系證實, pVax-Dsred-IRES-EGFP能成功轉入cos-7細胞并同時表達DsRed和EGFP基因。 本研究基因槍轟擊細胞24h后，可在激光共聚顯微鏡下觀察到紅、綠色熒光以及共表達的黃光，而對照組的細胞則沒有檢測到熒光細胞的表達，如圖3。該結果說明用基因槍方法成功將基因轉染到細胞中并得到表達，結果見圖4。
圖3 對照組24小時激光掃描共聚焦顯微鏡圖 A 明場細胞 B 對照組熒光圖 
圖4 基因搶轉染pVax-Dsred-IRES-EGFP24小時激光掃描共聚焦顯微鏡圖 A 綠色熒光 B 紅色熒光 C 明暢細胞 D紅,綠熒光共表達