基因組DNA提取純化的注意事項

微量樣本中 DNA 的含量很低，通常小于 5 ng DNA, 通常需要使用 carrier RNA 來提高產量（不會影響下游分析檢測）。如果需要使用 carrier RNA，那么在測量 OD 的時候會因為使用 carrier RNA 造成濃度測量有偏差（因為 RNA 在 260 nm 也有吸收）。

推薦使用 QIAamp DNA Micro Kit 從微量樣本中進行 DNA 純化，該試劑盒采用 MinElute 硅膠膜柱，洗脫體積可以低至 20 μl，同時通過兩步洗滌去除 PCR 抑制劑等污染物，最大程度從微量樣本中純化 DNA。

血液樣本可以是新鮮或凍存全血或干血片，由于血液樣本在采集后會迅速凝固，所以通常在采血時使用 EDTA，檸檬酸鹽或肝素進行抗凝。經過抗凝處理的血液樣本可以直接用于 DNA 純化，需要注意的是使用的 DNA 純化方法需要能夠去除上述抗凝劑，以免干擾下游 PCR 檢測。全血也可以在 DNA 純化前先進行白細胞富集等再進行 DNA 純化。

從血液中純化 DNA 的產量很大程度上取決于血液中的白細胞數量，而白細胞數量則和血液的供體情況有很大關聯（如貧血或感染都會造成白細胞數量變化）。上述情況必須在進行 DNA 純化前就應該考慮到。此外，有些動物有有核血，這意味著這類樣本中含有更多的 DNA，在從此類血樣中純化 DNA，上樣量需要減少 10 倍左右。

1. 哺乳動物細胞可以使用蛋白酶 K 進行裂解

2. 酵母細胞需要首先使用溶菌酶對細胞壁進行處理，然后使用蛋白酶或蛋白酶 K 進行消化

3. 許多細菌細胞可以使用裂解 buffer 和蛋白酶 / 蛋白酶 K 進行裂解，某些細菌如革蘭氏陽性菌需要預先使用溶菌酶對細胞壁進行處理

4. 細菌細胞需要先從生物體液中沉淀，然后從中純化細菌 DNA，拭子樣本需要先使用殺菌劑進行預處理然后再離心

5. 使用機械裂解會比用酶消化的效果要好，尤其是針對革蘭氏陽性菌或真菌而言

以上信息來源于QIAGEN 官網。